本文關(guān)鍵詞：雌激素及其受體與卵母細胞成熟的相關(guān)性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過測定取卵日人血清及卵泡液內(nèi)雌二醇水平、卵丘細胞雌激素-β受體mRNA的表達，探討卵泡液雌激素濃度與卵丘細胞E2-β受體mRNA的表達量的關(guān)系和卵母細胞成熟與卵丘細胞-β受體mRNA的表達量的相關(guān)性；通過觀察雌激素G蛋白偶聯(lián)受體GPR30在小鼠卵母細胞上的表達定位和不同時期的表達量以及體內(nèi)成熟和體外成熟的卵母細胞表達量的比較，探討GPR30對小鼠卵母細胞成熟調(diào)控作用和對卵母細胞體內(nèi)、體外成熟調(diào)控作用的差異。為探索體外環(huán)境和體內(nèi)微環(huán)境下雌激素通過調(diào)控雌激素受體的表達進而控制卵母細胞發(fā)育和凋亡的機制，調(diào)節(jié)控制卵母細胞的靜止、啟動及發(fā)育成熟提供理論依據(jù)。 方法 選擇因男性不孕行單精子卵母細胞胞質(zhì)內(nèi)注射（ICSI）治療的的患者34例，研究對象的一般資料：見附表1，所有研究對象的一般資料無差異性。在取卵日收集外周血、卵泡液及卵丘細胞，分別測定雌二醇濃度和ER-βmRNA的表達量，采用電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）檢測血清及卵泡液中雌二醇（E2）的水平，采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（Realtime-PCR）檢測卵丘細胞ER-βmRNA的表達量，并記錄卵母細胞成熟度并進行相關(guān)性分析。 選擇CD1系鼠齡為8－10周的雌性老鼠作為研究對象，通過促排卵方法獲取小鼠體內(nèi)成熟的卵母細胞（MII期），從無任何藥物刺激的小鼠獲得未成熟卵母細胞（GV期）經(jīng)體外成熟培養(yǎng)（IVM）發(fā)育至成熟卵母細胞（MII期）和老化卵母細胞（Aging期）。采用激光共聚焦掃描顯微鏡（LSM）獲取二維和三維（2D、3D）的顯微鏡圖片，鑒定GPR30在小鼠卵母細胞內(nèi)的定位并測定其表達量。運用蛋白質(zhì)免疫印跡的方法，鑒定不同成熟度卵母細胞膜組分中GPR30蛋白的表達量。 結(jié)果(1)取卵日每卵泡平均血清E2水平與卵泡液中E2水平呈正相關(guān)（P=0.002）。（2）MⅡ期卵母細胞內(nèi)卵泡液E2水平顯著高于MⅠ期和GV期卵母細胞水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P0.01。（3）MⅡ期卵母細胞的卵丘細胞中ER-βmRNA的表達量是MⅠ期的2.74倍（P0.01），是GV期的3.51倍（P0.01）。卵丘細胞的ER-βmRNA的表達量與卵泡液內(nèi)雌激素濃度呈正相關(guān)（4）GPR30為小鼠卵母細胞特異性的雌激素膜受體，在小鼠不同發(fā)育時期的卵母細胞均有表達（5）不同成熟期的卵母細胞，GPR30表達量不同，，各期表達量比較有顯著性差異（P0.01）。（6）GPR30表達量體外成熟的卵母細胞明顯低于體內(nèi)成熟的卵母細胞，兩者比較有顯著性差異（P0.05）。 結(jié)論（1）外周血雌激素水平可以間接反映卵泡液內(nèi)雌激素水平作為預(yù)測卵母細胞成熟度的指標；（2）ER-β在卵丘細胞的表達量與卵母細胞成熟度和卵泡液內(nèi)雌激素水平有正相關(guān)性（3）GPR30為小鼠卵母細胞特異性的雌激素膜受體。（4）卵母細胞膜GPR30的表達量和卵母細胞的成熟度有相關(guān)性。（5）體外培養(yǎng)能減少GPR30在卵母細胞膜的表達量。
【關(guān)鍵詞】：雌激素 雌激素受體 卵母細胞 卵丘細胞 卵母細胞成熟
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R321.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-13
• 引言13-21
• 材料與方法21-34
• 1 研究材料21-24
• 1.1 研究標本來源21-22
• 1.2 研究使用的主要試劑22
• 1.3 研究使用的主要儀器、設(shè)備22-24
• 1.4 其他實驗材料24
• 2 研究方法24-34
• 2.1 人體外受精過程及研究標本收集24-28
• 2.2 小鼠卵母細胞獲取和 GPR30 的定位與表達量的測定28-33
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)分析33-34
• 結(jié)果34-39
• 1 人卵母細胞成熟度與雌激素水平及其受體表達量的關(guān)系34-36
• 1.1 取卵日外周血 E2與卵泡液 E2的關(guān)系34
• 1.2 不同成熟度卵母細胞卵泡液中 E2水平的比較34-35
• 1.3 不同成熟度卵母細胞卵丘細胞中 ER-βmRNA 的比較35-36
• 2 雌激素膜受體 GPR30 在小鼠卵母細胞膜上的表達及變化36-39
• 2.1 雌激素 G 蛋白偶聯(lián)受體 GPR30 在度卵母細胞的定位確認36
• 2.2 雌激素膜受體 GPR30 在不同成熟度卵母細胞上的表達36
• 2.3 體外成熟卵母細胞和體內(nèi)成熟卵母細胞 GPR30 表達量的比較36-39
• 討論39-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻44-49
• 文獻綜述49-58
• 致謝58-59
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果59

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本文編號：402009