發(fā)布時間：2024-05-14 01:16

　　目的：本項目通過構建攜帶RP105基因的復制缺陷型重組腺病毒載體，間接冠脈在體轉染大鼠心肌，使RP105在心肌組織高表達，在大鼠在體心臟缺血再灌注模型中，以TLR-4信號通路為切入點，從基因表達、蛋白合成等多個層次研究RP105對心肌缺血再灌注損傷的保護作用，探討其分子機制。 方法： SPF級雄性SD大鼠40只，隨機分為4組(n=10)：生理鹽水+假手術組(Sham組，只穿線不結扎)、生理鹽水+缺血再灌注組(I/R組）、Ad-RP105+缺血再灌注組(Ad-R組)、Ad-GFP+缺血再灌注組(Ad-G組)。重組腺病毒間接冠狀動脈轉染大鼠心肌，3d后建立心肌缺血再灌注模型。術后2h空氣栓塞法處死大鼠，采用光鏡觀察心肌組織的病理形態(tài)學改變；Evans blue和TTC雙染法估測心肌梗死面積；酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定心肌TNF-α和IL-6的含量；Real-time PCR和Western blot檢測心肌RP105、TLR-4、MyD88、 NF-κB mRNA水平和蛋白表達情況。 結果：(1)采用攜帶綠色熒光蛋白基因的重組腺病毒(Ad-GFP)成功轉染大鼠在體心肌，結果顯示，大...

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖3：大鼠心肌腺病毒成功轉染后的綠色熒光表達成功

大鼠心肌腺病毒成功轉染后的綠色熒光表模型的成功構建評估：在血管結扎即刻，肢體Ⅱ導聯(lián)明缺血模型構建成功；松開結扎線，可。本次動物實驗造模進展順利，在結電圖出現(xiàn)S-T段顯著抬高，QRS波增失常，如多為室性心律失常，部分大鼠驗造模中，40只大鼠中因為麻醉過量成功率達到95%。....

圖4大鼠各時間段心電圖表現(xiàn)（Ⅱ導聯(lián)）

說明成功再灌。本次動物實驗造模進展順利，在結扎即刻，可見心尖由于缺血變白，肢體導聯(lián)心電圖出現(xiàn)S-T段顯著抬高，QRS波增高、變寬；結扎血管后6-8min開始出現(xiàn)心律失常，如多為室性心律失常，部分大鼠甚至發(fā)生室顫，可用利多卡因搶救；在本次實驗造模中，40只大鼠中因為麻醉過....

圖5各組心肌光學顯微鏡下組織病理改變(HE,×100)

Ad-R組Ad-G組圖5各組心肌光學顯微鏡下組織病理改變(HE,×100)2.2心肌梗死面積的檢測心肌梗死面積是評價心肌梗死嚴重程度的一個金標準。本實驗應用Evansblue和TTC雙染法進行心肌染色[22]，計算機圖像分析系統(tǒng)計算心肌缺血和梗死面積；梗死面....

圖6各組大鼠心注：左圖從上到下依次為IR組、Ad-R組、Ad

圖6各組大鼠心注：左圖從上到下依次為IR組、Ad-R組、A柱狀圖，與IR組相比，★P<0.05第三部分ELISA測定大鼠心肌ELISA測定的大鼠缺血再灌注前后心3所示，與Sham組相比，缺血再灌注損增多，但是IR組與Ad-G組較Sham組顯....

本文編號：3972979