目的在成功制備中和性生長抑素(SS)單克隆抗體的基礎(chǔ)上,制備了SS抗獨(dú)特型卵黃抗體Ab2,鑒定其生物學(xué)特性,探討其在促進(jìn)動(dòng)物生長方面的應(yīng)用。方法用對SS具有免疫中和性的單克隆抗體2E7免疫產(chǎn)蛋雞,篩選并收集有高效價(jià)抗獨(dú)特型卵黃抗體的雞蛋,分離蛋黃,破碎蛋黃組織,用稀釋和酸化沉淀法除脂蛋白,用冷酒精沉淀法純化抗獨(dú)特型卵黃抗體Ab2。用間接ELISA檢測卵黃Ab2的特異性、效價(jià)和濃度,用競爭抑制和動(dòng)物免疫檢測卵黃Ab2β,用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測卵黃Ab2β促進(jìn)雞生長的效力。結(jié)果該SS抗獨(dú)特型卵黃抗體Ab2效價(jià)為10^-5,含量為8 mg/mL。且與兔抗SS抗體發(fā)生免疫反應(yīng),不與兔抗生長激素抗體、兔抗胰島素抗體、兔抗胃泌素抗體發(fā)生免疫反應(yīng)。該SS卵黃Ab2能和異種動(dòng)物兔產(chǎn)生的SS抗體發(fā)生免疫反應(yīng),該免疫反應(yīng)能被SS競爭抑制,該SS卵黃Ab2能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生SS Ab3,該SS Ab3能和SS發(fā)生免疫反應(yīng),說明它是SS卵黃Ab2β。用其作疫苗,以0.8μg/只和3.2μg/只分別皮下注射免疫小鼠,以0.8μg/羽和3.2μg/羽分別肌肉注射免疫雞,以3.2μg/尾浸泡免疫多寶魚。一個(gè)...

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圖2SS抗獨(dú)特型卵黃抗體特異性ELISA檢測結(jié)果A:包被兔抗SS抗體;B:包被兔抗GH抗體;C:包被兔抗胰島素抗體;D:包被兔抗胃泌素抗體．

Ab2;6:稀釋105倍的Ab2;7:稀釋107倍的Ab2;8:稀釋108倍的Ab2;9:稀釋109倍的Ab2;C:對照組，加PBS．圖1SS抗獨(dú)特型卵黃抗體效價(jià)ELISA檢測結(jié)果2．2抗獨(dú)特型卵黃抗體Ab2特異性好本研究制備的SS抗獨(dú)特型卵黃抗體只與兔抗SS抗體發(fā)生免疫反應(yīng)，不....

圖3雞IgY標(biāo)準(zhǔn)曲線

2．3抗獨(dú)特型卵黃抗體Ab2濃度根據(jù)測定的標(biāo)準(zhǔn)品A值(表1)，用CurveExpert分析軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖3);根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得本研究制備的SS抗獨(dú)特型卵黃抗體的含量為8mg/mL。表1SS抗獨(dú)特型卵黃抗體含量測定(A值)稀釋倍數(shù)標(biāo)準(zhǔn)品Ab2(IgY)21．37952．7....

圖4SS影響SS抗獨(dú)特型卵黃抗體Ab2和SSmAb的結(jié)合bP＜0．01vs對照組．

圖5SS抗獨(dú)特型卵黃抗體Ab2影響SSmAb與SS的結(jié)合bP＜0．01vs對照組．

Ab(1∶1000)與SS(10μg/mL)的結(jié)合抑制率為66%(圖5)。2．5抗獨(dú)特型卵黃抗體Ab2誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生SS抗體實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，SS抗獨(dú)特型卵黃抗體Ab2免疫小鼠后，其血清(1∶500)能和SS產(chǎn)生強(qiáng)陽性免疫反應(yīng)，A值為1．230±0．101，對照組A值為0．101±0．....

本文編號：3973470