哺乳動(dòng)物受精過(guò)程中,卵子表面的透明帶3(ZP3)蛋白作為精子初級(jí)受體,參與精子與卵子的結(jié)合并誘發(fā)頂體反應(yīng)。ZP3特異性抗體能夠與天然的ZP3結(jié)合從而阻斷精卵結(jié)合導(dǎo)致不育。利用ZP3作為抗原制備的疫苗來(lái)誘導(dǎo)免疫不育是人類(lèi)理想的避孕手段,也是控制動(dòng)物生育的人道之選。長(zhǎng)期以來(lái),人們嘗試?yán)貌煌?lèi)型的不育疫苗、發(fā)送途徑及免疫佐劑增強(qiáng)ZP3疫苗的免疫反應(yīng),以開(kāi)發(fā)出高效的避孕疫苗。DNA疫苗是一種安全、廉價(jià)、易于生產(chǎn)及保存的疫苗類(lèi)型,在病毒性疾病的預(yù)防和控制方面得到了廣泛的應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)室前期的研究結(jié)果表明,肌肉注射和滴鼻免疫鼠ZP3 (mZP3) DNA疫苗均能導(dǎo)致小鼠不育,但DNA疫苗激發(fā)的體液免疫反應(yīng)較弱,需要通過(guò)添加免疫佐劑來(lái)增強(qiáng)免疫不育的效果。增強(qiáng)樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells, DCs)對(duì)DNA疫苗的遞呈效率,是提高DNA疫苗免疫原性的關(guān)鍵。粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor, GM-CSF)能夠促進(jìn)包括DCs在內(nèi)的抗原遞呈細(xì)胞(antigen presenting cells, APC...

【文章頁(yè)數(shù)】：125 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖３?ＧＭ－ＣＳＦ和ＦＩｔ３Ｌ對(duì)ＤＣ免疫原性相互影響的分子解釋??通過(guò)激活ＳＴＡＴ３，?Ｆ怕Ｌ促進(jìn)了?１ＤＯ的表達(dá)抑制了?ＮＦ－ｋＢ和ＭＨＣ－ＩＩ的表達(dá)，因此抑制了?ＤＣ的??免疫原性

ＧＭ－ＣＳＦ誘導(dǎo)的信號(hào)通路起始于ＪＡＫ２，通過(guò)激活ＳＴＡＴ５間接活化ＮＦ－ｋＢ或直接活??化ＮＦ－ｋＢ來(lái)促進(jìn)ＤＣｓ發(fā)育，尤其促進(jìn)遷移性ＤＣｓ的發(fā)育及致免疫活性，增強(qiáng)機(jī)體的固??有免疫應(yīng)答。該核也信號(hào)通路中ＳＴＡＴ５和ＮＦ－ｋＢ是關(guān)鍵的信號(hào)分子（圖３）?Ｗ。??ＳＴＡＴ５能夠促進(jìn)人....

圖２重組質(zhì)粒在小鼠巧臟內(nèi)的瞬時(shí)表達(dá)??高壓水動(dòng)力轉(zhuǎn)染化后提取贓臟ｍＲＮＡ反轉(zhuǎn)錄，并Ｗ?ｃＤＮＡ及未經(jīng)反轉(zhuǎn)錄的ＲＮＡ作為對(duì)照，??

出４０４ｂｐ的目的條帶，而其它陰性對(duì)照或經(jīng)ＰＣＤＮＡ３．０轉(zhuǎn)染后的肝臟ｃＤＮＡ均沒(méi)有出現(xiàn)??目的條帶。該結(jié)果表明，ｐｃＤ－ＧＭ－ＣＳＦ質(zhì)粒能夠在真核細(xì)胞中表達(dá)，可Ｗ用于后期的免??疫接種實(shí)驗(yàn)（圖２）。??ｉＨＩ??圖２重組質(zhì)粒在小鼠巧臟內(nèi)的瞬時(shí)表達(dá)??高壓水動(dòng)力轉(zhuǎn)染化后提取贓臟ｍ....

圖３?ｐｃＤ－ｍＺＰ３質(zhì)粒雙酶切結(jié)果??攜帶ｐｃＤ－ｍＺＰ３的菌液涂布ＬＢ板后挑取單克隆經(jīng)ＥｃｏＲＩ和Ｘｂａｌ雙酶切鑒定：１，ｐｃＤ－ｍＺＰ３質(zhì)??

用于免疫的ｍＺＰ３ＤＮＡ疫苗（ｐｃＤ－ｍＺＰ３）質(zhì)粒由本實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建并保存ｔＷ。將??攜帶ｐｃＤ－ｍＺＰ３質(zhì)粒的大腸桿菌復(fù)蘇并大量擴(kuò)増后用堿裂解法提取質(zhì)粒ＤＮＡ，并用雙??酶切鑒定，經(jīng)１％瓊脂糖電泳檢測(cè)可見(jiàn)１２００ｂｐ左右目的條帶（圖３）。??３３??

圖５?ｐｃＤ－?ＧＭ－ＣＳＦ促進(jìn)脾臟ＡＰＣｓ成熟??ＲＴ－ＰＣ民檢測(cè)共刺激因子ＣＤ８０，ＣＤ８３ＣＤ８６在贓臟中的表達(dá)

激因子ＣＤ８０，?ＣＤ８３，?ＣＤ％的表達(dá)情況。與未注射ｐｃＤ－ＧＭ－ＣＳＦ組相比，ｐｃＤ－ＧＭ－ＣＳＦ??提前４ｄ處理或與ｐｃＤ－ｍＺＰ３同時(shí)注射均能促進(jìn)脾臟組織中ＣＤ８０，?ＣＤ８３和ＣＤ８６分子??的上調(diào)表達(dá)。而ｐｃＤ－ＧＭ－ＣＳＦ＋ｐｃＤ－ｍＺＰ３注射組共刺激因子的表達(dá)水....

本文編號(hào)：3907745