瘧疾仍然是全球最重要的感染性疾病之一，每年有近2百萬人死于該病，其中大多死于惡性瘧。由于瘧原蟲抗藥性和蚊媒耐藥性的不斷擴(kuò)展，瘧疾藥物防治面臨困境，研制有效的抗瘧疫苗是當(dāng)前的迫切需要。而新型疫苗—核酸疫苗(主要為DNA疫苗)的出現(xiàn)為研制瘧疾疫苗帶來極大的希望。以美國海軍醫(yī)學(xué)研究所Hoffman SL為首自1994年開始研究瘧疾紅外期DNA疫苗，至今已取得可喜的結(jié)果。而有效的瘧疾疫苗應(yīng)為包含紅內(nèi)期、紅外期和傳播阻斷期各期抗原基因的復(fù)合型疫苗。我教研室自1995年開始在TDR和全軍醫(yī)藥衛(wèi)生青年基金的資助下，開展瘧疾紅內(nèi)期DNA疫苗研究。 本研究選擇已證明具有明顯保護(hù)性的惡性瘧原蟲紅內(nèi)期若干抗原的基因片段作為DNA疫苗的外源基因，它們是裂殖子表面蛋白1(MSP1)的17區(qū)基因片段(簡稱MSP1-17)，MSP1內(nèi)編碼42kd蛋白的15-17區(qū)基因片段，富含組氨酸蛋白2(HRPⅡ)基因片段和編碼多個T／B細(xì)胞表位的合成雜合基因片段(含MSP1、MSA2、RESA、IL-1和TT的T／B細(xì)胞表位，簡稱HG)。本課題主要進(jìn)行了如下研究工作： 1) 真核表達(dá)重組質(zhì)粒的構(gòu)建：首先PCR擴(kuò)...

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1-12%瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物

1.4擴(kuò)增產(chǎn)物的克隆和測序[‘381PCR產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳后，低溫點(diǎn)瓊脂糖凝膠回收約30OPb左右的區(qū)帶，經(jīng)幻neow酶兩端補(bǔ)平后，用asll和BmaHI酶切，將酶切后的PCR產(chǎn)物與經(jīng)相同酶切的pUC18連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化氯化鈣制備的新鮮感受態(tài).EocliJM109菌，涂....

圖1一2陽性克隆的PCR鑒定(2%瓊脂糖電泳)

.22擴(kuò)增片段的克隆及鑒定挑取PCR產(chǎn)物與pUC18的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化后的若干個白色菌落進(jìn)行PCR鑒定，結(jié)果含三株惡性瘧原蟲擴(kuò)增片段的重組克隆均得到陽性結(jié)果(圖1-2)，將PCR鑒定陽性的克隆進(jìn)行Sall和BnalHl酶切鑒定結(jié)果，可見重組克隆均切出300bp大小的片段(圖1一3)。....

圖1一3PCR鑒定陽性重組子的酶切鑒定l為pGEMEx一7ZfHaelll標(biāo)準(zhǔn)分子量;2、3和4為PeR鑒定陽性的

.22擴(kuò)增片段的克隆及鑒定挑取PCR產(chǎn)物與pUC18的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化后的若干個白色菌落進(jìn)行PCR鑒定，結(jié)果含三株惡性瘧原蟲擴(kuò)增片段的重組克隆均得到陽性結(jié)果(圖1-2)，將PCR鑒定陽性的克隆進(jìn)行Sall和BnalHl酶切鑒定結(jié)果，可見重組克隆均切出300bp大小的片段(圖1一3)。....

圖1一4MSPI一17測序結(jié)果(僅示FUP株測序結(jié)果)

.3陽性克隆序列測定及序列比較對陽性克隆插入片段進(jìn)行基因序列測定(圖1一4)。與己知的17區(qū)基因比較，確為所需的惡性瘧原蟲MSPl7l區(qū)基因。所測序列兩端含有PCR引物序列、正確的酶切位點(diǎn)、起始碼和終止碼。經(jīng)比較，三株惡性瘧原蟲MSPI17區(qū)基因序列基本相同，其中海南株和FUP株....

本文編號：3908286