本課題旨在建立一種研究擾流對血管內(nèi)皮細(xì)胞活化和血栓生成影響的小鼠模型,并利用其探討流體剪切力調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞vWF分泌的機(jī)制。小鼠麻醉后暴露左側(cè)頸總動脈及其分支,結(jié)扎頸外動脈后閉合創(chuàng)口。分別于術(shù)前和術(shù)后的第1、7 d,以超聲多普勒無創(chuàng)檢測左右兩側(cè)頸總動脈血流模式和血流速度;取血管以免疫熒光檢測結(jié)扎前后血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子VCAM1、E-selectin、ICAM1的表達(dá)和血管內(nèi)皮層vWF水平,可確認(rèn)左側(cè)頸總動脈處擾流的形成及內(nèi)皮vWF分泌的增加。結(jié)扎術(shù)后以FeCl3孵育頸總動脈誘導(dǎo)內(nèi)皮損傷,測血流速度發(fā)現(xiàn)流速為零,提示血栓形成。為實時監(jiān)測血栓的形成,對頸靜脈注射羅丹明6G標(biāo)記血小板,熒光顯微鏡下可見血小板于FeCl₃孵育處聚集。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)結(jié)扎組的血管與未結(jié)扎組相比,其FeCl3誘導(dǎo)的血栓生成速度顯著加快,可能機(jī)制是由于擾流型剪切力激活內(nèi)皮SNARE(可溶性N-乙基馬來酰亞胺敏感因子結(jié)合蛋白受體)蛋白VAMP3與SNAP23,造成vWF分泌增加。這一假設(shè)在用平行板式流動腔剪切力加載系統(tǒng)對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞施加脈沖型剪切力(12±4 dynes/cm²

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