[目的]克隆紅色毛癬菌(Trichophyton rubrum)無(wú)機(jī)磷酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Inorganic phosphate transporter,PHO88)基因,構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒,并對(duì)PHO88蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析。[方法]根據(jù)Gen Bank公布的T. rubrum CBS 118892菌株pho88基因序列(XP-003235348),設(shè)計(jì)合成特異性引物,提取紅色毛癬菌總RNA,反轉(zhuǎn)錄為c DNA,PCR擴(kuò)增pho88基因,構(gòu)建到原核表達(dá)載體p ET-28a上,測(cè)序鑒定其序列,并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析。[結(jié)果]紅色毛癬菌pho88基因全長(zhǎng)582 bp,編碼193個(gè)氨基酸。PHO88蛋白含有1個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域,細(xì)胞亞定位為分泌信號(hào)途徑蛋白,PHO88含有16個(gè)磷酸化修飾位點(diǎn),其二級(jí)結(jié)構(gòu)主要由α-螺旋構(gòu)成,高級(jí)結(jié)構(gòu)為全α型蛋白質(zhì)。[結(jié)論]成功克隆紅色毛癬菌pho88基因及構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒,為后續(xù)PHO88蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)奠定基礎(chǔ),為后續(xù)開(kāi)發(fā)靶向PHO88的抗真菌藥物,提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.2 試劑
        1.1.3 儀器
    1.2 方法
        1.2.1 紅色毛癬菌總RNA的提取及cDNA第一鏈合成
        1.2.2 引物設(shè)計(jì)
        1.2.3 pho88基因的擴(kuò)增
        1.2.4 重組原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.2.5 生物信息學(xué)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 紅色毛癬菌總RNA提取及cDNA第一鏈合成
    2.2 pho88基因的擴(kuò)增
    2.3 重組原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定
    2.4 Pho88蛋白生物信息學(xué)分析
3 討論
4 結(jié)論



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