小鼠誘導性多能干細胞（mouse induced pluripotent stem，miPS）是一類具有自我更新和多向分化潛能的特殊細胞。在特定的條件下，誘導多功能干細胞可以增殖并分化為多種類型的細胞，但保持干細胞的高增殖率和未分化狀態(tài)則高度依賴于其所處的生長微環(huán)境，即干細胞壁龕。干細胞與其壁龕之間通過相互作用，實現(xiàn)miPS自我更新能力和分化之間的平衡。如何在體外構建一個這樣的微環(huán)境是miPS研究的重要環(huán)節(jié)。 本研究采用不同濃度甲醛（formaldehyde，F(xiàn)A）固定小鼠胚胎成纖維細胞（mouse embryo fibroblast，MEF）作為飼養(yǎng)層細胞，體外培養(yǎng)miPS。探討化學固定后MEF細胞膜流動性對miPS克隆形成率以及干細胞生物特性的影響，篩選適宜的miPS體外培養(yǎng)條件。研究結果表明，利用2.5%FA溫和固定MEF飼養(yǎng)層細胞，可保持飼養(yǎng)層細胞膜表面的流動性，這種穩(wěn)定的微環(huán)境能夠滋養(yǎng)miPS在體外增殖，并保持miPS的自我更新能力和未分化的穩(wěn)定性，培養(yǎng)出高純度的miPS細胞。 本實驗的創(chuàng)新之處在于﹕1.采用溫和的FA化學固定的MEF作為飼養(yǎng)層細胞，不但保持飼養(yǎng)層細胞膜流動性...

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【學位級別】：博士

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提要
中文摘要
Abstract
前言
第1章 文獻綜述
    1.1 小鼠誘導性多能干細胞（miPS）研究進展
    1.2 誘導多能干細胞的標志物研究進展
    1.3 iPS 細胞的培養(yǎng)
第2章 小鼠胚胎成纖維細胞體外培養(yǎng)及飼養(yǎng)層細胞制備
    概述
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物：
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗儀器
        2.1.4 實驗試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠胚胎成纖維細胞的分離培養(yǎng)
        2.2.2 小鼠成纖維胚胎細胞的傳代培養(yǎng)
        2.2.3 小鼠胚胎成纖維飼養(yǎng)層細胞的凍存
        2.2.4 飼養(yǎng)層細胞（MEF）的制備
        2.2.5 轉染 GFP-EGFR 的 MEF 細胞制備
        2.2.6 單分子成像檢測
        2.2.7 評估分子運動情況及膜擴散率的計算
    2.3 實驗結果與討論
        2.3.1 小鼠胚胎成纖維細胞的細胞形態(tài)與生長狀態(tài)
        2.3.2 小鼠胚胎成纖維細胞的化學固定
        2.3.3 MEF 細胞膜表面流動性的分析
    2.4 小結
第3章 飼養(yǎng)層細胞膜流動性對 miPS 生長作用的實驗研究
    概述
    3.1 實驗試劑
    3.2 細胞來源
    3.3 實驗試劑配制
    3.4 實驗方法
        3.4.1 小鼠誘導多功能干細胞克隆率形成的分析
        3.4.2 堿性磷酸酶活性檢測
        3.4.3 miPS 細胞的 SSEA-1 和 Oct3/4 的表達水平
        3.4.4 miPS 細胞表面標記的熒光顯微鏡檢測
    3.5 實驗結果與討論
        3.5.1 FA 固定 MEF 細胞對 miPS 克隆形成率的影響
        3.5.2 2.5%FA 固定 MEF 細胞表面的生物活性分析
    3.6 小結
第4章 研究總結
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文及取得的科研成果
致謝



本文編號：3865000