小鼠誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞（mouse induced pluripotent stem，miPS）是一類具有自我更新和多向分化潛能的特殊細(xì)胞。在特定的條件下，誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞可以增殖并分化為多種類型的細(xì)胞，但保持干細(xì)胞的高增殖率和未分化狀態(tài)則高度依賴于其所處的生長微環(huán)境，即干細(xì)胞壁龕。干細(xì)胞與其壁龕之間通過相互作用，實現(xiàn)miPS自我更新能力和分化之間的平衡。如何在體外構(gòu)建一個這樣的微環(huán)境是miPS研究的重要環(huán)節(jié)。 本研究采用不同濃度甲醛（formaldehyde，F(xiàn)A）固定小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（mouse embryo fibroblast，MEF）作為飼養(yǎng)層細(xì)胞，體外培養(yǎng)miPS。探討化學(xué)固定后MEF細(xì)胞膜流動性對miPS克隆形成率以及干細(xì)胞生物特性的影響，篩選適宜的miPS體外培養(yǎng)條件。研究結(jié)果表明，利用2.5%FA溫和固定MEF飼養(yǎng)層細(xì)胞，可保持飼養(yǎng)層細(xì)胞膜表面的流動性，這種穩(wěn)定的微環(huán)境能夠滋養(yǎng)miPS在體外增殖，并保持miPS的自我更新能力和未分化的穩(wěn)定性，培養(yǎng)出高純度的miPS細(xì)胞。 本實驗的創(chuàng)新之處在于﹕1.采用溫和的FA化學(xué)固定的MEF作為飼養(yǎng)層細(xì)胞，不但保持飼養(yǎng)層細(xì)胞膜流動性...

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
提要
中文摘要
Abstract
前言
第1章 文獻綜述
    1.1 小鼠誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞（miPS）研究進展
    1.2 誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的標(biāo)志物研究進展
    1.3 iPS 細(xì)胞的培養(yǎng)
第2章 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)及飼養(yǎng)層細(xì)胞制備
    概述
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物：
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗儀器
        2.1.4 實驗試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        2.2.2 小鼠成纖維胚胎細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
        2.2.3 小鼠胚胎成纖維飼養(yǎng)層細(xì)胞的凍存
        2.2.4 飼養(yǎng)層細(xì)胞（MEF）的制備
        2.2.5 轉(zhuǎn)染 GFP-EGFR 的 MEF 細(xì)胞制備
        2.2.6 單分子成像檢測
        2.2.7 評估分子運動情況及膜擴散率的計算
    2.3 實驗結(jié)果與討論
        2.3.1 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)與生長狀態(tài)
        2.3.2 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的化學(xué)固定
        2.3.3 MEF 細(xì)胞膜表面流動性的分析
    2.4 小結(jié)
第3章 飼養(yǎng)層細(xì)胞膜流動性對 miPS 生長作用的實驗研究
    概述
    3.1 實驗試劑
    3.2 細(xì)胞來源
    3.3 實驗試劑配制
    3.4 實驗方法
        3.4.1 小鼠誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞克隆率形成的分析
        3.4.2 堿性磷酸酶活性檢測
        3.4.3 miPS 細(xì)胞的 SSEA-1 和 Oct3/4 的表達水平
        3.4.4 miPS 細(xì)胞表面標(biāo)記的熒光顯微鏡檢測
    3.5 實驗結(jié)果與討論
        3.5.1 FA 固定 MEF 細(xì)胞對 miPS 克隆形成率的影響
        3.5.2 2.5%FA 固定 MEF 細(xì)胞表面的生物活性分析
    3.6 小結(jié)
第4章 研究總結(jié)
參考文獻
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及取得的科研成果
致謝



本文編號：3865000