發(fā)布時(shí)間：2023-05-24 23:05

　　研究背景： 氯離子通道在細(xì)胞興奮性調(diào)節(jié)，跨上皮物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)，細(xì)胞容 積調(diào)節(jié)，細(xì)胞器酸化作用中發(fā)揮重要的作用，甚至在細(xì)胞免疫 應(yīng)答，細(xì)胞遷移，細(xì)胞增殖和分化等過程中也有一定作用。這 種功能的多樣性對(duì)應(yīng)于不同種類的氯離子通道，而且這些通道 由多種完全不同的基因編碼。電壓門控氯離子通道（ClC）是其中 的一類，而且ClC基因分布廣泛，存在于動(dòng)物、植物、酵母和 細(xì)菌中。目前從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中已經(jīng)克隆得到了九種不同的ClC 通道。ClC通道的功能缺失或改變與人類的某些遺傳性疾病有 密切的關(guān)系，如先天性肌強(qiáng)直，腎結(jié)石，Bartter’s綜合征。ClC-1 氯離子通道（ClC-1）是第一個(gè)從哺乳動(dòng)物中克隆得到的ClC通 道，其主要表達(dá)于骨骼肌，但在心臟、腎臟和平滑肌中也有少 第四軍醫(yī)大學(xué)博士論文 量表達(dá)。目前的研究結(jié)果表明，CIC－1 與先天性肌強(qiáng)直疾病關(guān) 系密切。 CIC＊作為哺乳動(dòng)物中第一個(gè)發(fā)現(xiàn)的趴 通道，近十年來 ...

【文章頁數(shù)】：148 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
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中文摘要
英文摘要
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 ClC通道的生物學(xué)及相關(guān)疾病
        1.1.1 ClC通道的分類
        1.1.2 ClC通道的結(jié)構(gòu)和典型特性
        1.1.3 ClC通道的生理作用和相關(guān)疾病
        1.1.4 結(jié)論
    1.2 ClC通道基因轉(zhuǎn)錄中剪接的多樣性及通道亞型
    1.3 ClC-1的研究進(jìn)展評(píng)價(jià)
    1.4 C6細(xì)胞氯離子通道的研究現(xiàn)狀分析
2 問題提出及本文的研究目標(biāo)和內(nèi)容
3 材料和方法
    3.1 細(xì)胞的培養(yǎng)
    3.2 離子通道cDNA的克隆方法
        3.2.1 引物設(shè)計(jì)
        3.2.2 細(xì)胞總mRNA的提取
        3.2.3 3'端的擴(kuò)增
        3.2.4 5'端的擴(kuò)增
        3.2.5 中間段的分段擴(kuò)增
        3.2.6 cDNA的電泳、提純和測(cè)序
        3.2.7 GenBank數(shù)據(jù)庫檢索與擴(kuò)增片段的確認(rèn)
        3.2.8 cDNA質(zhì)粒載體的構(gòu)建和cDNA的亞克隆
        3.2.9 內(nèi)切酶的設(shè)計(jì)與cDNA片段的連接策略
        3.2.10 質(zhì)粒的擴(kuò)增和提純
    3.3 通道基因的體外轉(zhuǎn)錄
    3.4 非洲爪蟾卵母細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
        3.4.1 爪蟾的飼養(yǎng)
        3.4.2 卵母細(xì)胞分離和培養(yǎng)用液體
        3.4.3 手術(shù)方法
        3.4.4 卵母細(xì)胞的分離
        3.4.5 卵母細(xì)胞的挑選
        3.4.6 卵母細(xì)胞的培養(yǎng)
    3.5 mRNA的納升注射與表達(dá)
    3.6 雙電極電壓鉗電生理實(shí)驗(yàn)
        3.6.1 記錄的條件和方法
        3.6.2 記錄用液體
    3.7 數(shù)據(jù)分析的工具和方法
4 結(jié)果
    4.1 大鼠ClC-1的五個(gè)通道亞型的cDNA序列及氨基酸序列
        4.1.1 cDNA3'端的獲取
        4.1.2 cDNA近5'端片段的獲取
        4.1.3 cDNA中間片段的獲取
        4.1.4 片段的連接和大鼠ClC-1的5個(gè)通道亞型全長(zhǎng)cDNA的獲取
        4.1.5 大鼠ClC-1的5個(gè)通道亞型的氨基酸序列特征
        4.1.6 cDNA的體外轉(zhuǎn)錄得到mRNA
    4.2 大鼠ClC-1五個(gè)通道亞型基因的表達(dá)和電生理特性
        4.2.1 M5的通道電流與離子選擇性
        4.2.2 M5的穩(wěn)態(tài)相對(duì)開放率對(duì)電壓和氯離子濃度的依賴性
        4.2.3 9-AC對(duì)M5的阻斷
        4.2.4 M5的通道電流對(duì)細(xì)胞外pH的依賴性
    4.3 大鼠WT ClC-1的通道電流與離子選擇性
    4.4 大鼠WT ClC-1對(duì)電壓和細(xì)胞外氯離子濃度的依賴性
    4.5 細(xì)胞外Ⅰ^-對(duì)大鼠WT ClC-1的阻斷
    4.6 9-AC對(duì)大鼠WT ClC-1的阻斷
    4.7 細(xì)胞外pH的變化對(duì)大鼠WT ClC-1的影響
        4.7.1 細(xì)胞外pH的變化對(duì)通道電流的影響
        4.7.2 細(xì)胞外pH的變化對(duì)通道相對(duì)開放率的影響
        4.7.3 細(xì)胞外Ⅰ^-在不同pH下的阻斷作用
        4.7.4 細(xì)胞外9-AC在不同pH下的阻斷作用
    4.8 通道亞型與大鼠WT ClC-1共同表達(dá)的通道的基本特性
    4.9 WT ClC-1門控機(jī)理模型的建立與分析
    4.10 通道電流長(zhǎng)時(shí)間動(dòng)態(tài)檢測(cè)和記錄軟件的設(shè)計(jì)
5 討論
    5.1 ClC-1組織分布及作用的多樣性
    5.2 ClC-1基因轉(zhuǎn)錄中剪接多樣性的機(jī)理
    5.3 ClC-1結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系的進(jìn)一步揭示
    5.4 9-AC濃度依賴性阻斷機(jī)制的分析
    5.5 細(xì)胞外Ⅰ^-的濃度依賴性阻斷和離子選擇性原理
    5.6 ClC-1存在可滴定的電壓感受器
    5.7 ClC-1的非均衡性的門控機(jī)理
    5.8 結(jié)論和展望
參考文獻(xiàn)
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致謝



本文編號(hào)：3822455