目的探討PTEN對大鼠原始卵泡激活和生長的調(diào)控作用和機制。方法 2日齡大鼠卵巢在Waymouth培養(yǎng)系統(tǒng)中培養(yǎng)0、4和8 d,用HE染色檢測慢病毒PTEN siRNA的沉默效率及其對原始卵泡生長啟動情況。同步用實時定量聚合酶鏈反應(RT-PCR)和免疫組織化學染色檢測PTEN mRNA和蛋白在卵泡生長中的表達和動態(tài)變化;用慢病毒PTEN-shRNA沉默卵巢中PTEN表達后,觀察對原始卵泡啟動生長及雌二醇和孕酮分泌的影響;此外,利用PI3K抑制劑LY294002探討了PTEN在原始卵泡形成過程中的可能信號通路。結(jié)果 PTEN mRNA和蛋白在原始卵泡中均有表達,隨著原始卵泡的發(fā)育,其表達水平降低(P<0.01);經(jīng)PTEN-shRNA慢病毒轉(zhuǎn)染后,熒光成像顯示慢病毒在體外已成功轉(zhuǎn)染到卵巢組織,HE染色顯示原始卵泡數(shù)量減少(P<0.01),表明PTEN參與了原始卵泡的起始。結(jié)論 PTEN可通過PI3K信號通路和調(diào)節(jié)雌、孕激素分泌調(diào)控原始卵泡發(fā)育。它在原始卵泡的發(fā)育啟動中起著重要的作用。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗動物:
        1.1.2 主要試劑:
    1.2 方法
        1.2.1 卵巢采集和體外培養(yǎng):
        1.2.2 慢病毒轉(zhuǎn)染卵巢組織:
        1.2.3 原始卵泡的形態(tài)學觀察和PTEN蛋白分析:
        1.2.4 RT-PCR檢測PTEN mRNA在原始卵泡中的表達:
        1.2.5 慢病毒轉(zhuǎn)染后原始卵泡的發(fā)育:
        1.2.6 卵巢Waymouth培養(yǎng)液激素水平:
    1.3 統(tǒng)計學分析
2 結(jié)果
    2.1 原始卵泡中PTEN蛋白的定位及表達的時效性變化
    2.2 PTEN-shRNA慢病毒轉(zhuǎn)染PTEN在原始卵泡中的表達變化
    2.3 PTEN-shRNA慢病毒轉(zhuǎn)染后的原始卵泡的發(fā)育
    2.4 檢測卵巢Waymouth培養(yǎng)液激素水平
    2.5 PI3K抑制劑培養(yǎng)后原始卵泡發(fā)育及PTEN mRNA和蛋白表達變化
    2.6 PTEN shRNA慢病毒轉(zhuǎn)染后原始卵泡中PI3K蛋白表達變化
3 討論



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