發(fā)布時(shí)間：2023-05-09 22:35

　　造血是一個(gè)受高度調(diào)控、具有復(fù)雜細(xì)胞社會性行為的生理過程，造血干／祖細(xì)胞在這一過程中處于中心地位。造血干／祖細(xì)胞表面具有多種分化階段特異性標(biāo)志分子、細(xì)胞因子受體分子及粘附分子等多種細(xì)胞表面分子，在造血細(xì)胞的增殖、分化、遷移和歸巢等過程中發(fā)揮重要作用。分離這些細(xì)胞表面分子及其抗體，研究它們的結(jié)構(gòu)與功能作用是實(shí)驗(yàn)血液學(xué)的重要研究課題，對于深入理解血細(xì)胞發(fā)生、發(fā)展的生理及病理過程，發(fā)展血液系統(tǒng)惡性腫瘤的新型診療方法和生物制劑具有重要的理論價(jià)值和實(shí)際意義。本論文的目的在于尋找新的有功能的抗造血干／祖細(xì)胞表面分子的抗體，探索其功能特性，并通過所獲得的抗體分離抗原分子及其基因。 首先，構(gòu)建KGla細(xì)胞免疫小鼠的噬菌體展示單鏈抗體(scFv)文庫。用具有造血干／祖細(xì)胞特征的人髓系自血病細(xì)胞系KGla細(xì)胞免疫小鼠，取其脾細(xì)胞，提取RNA，利用設(shè)計(jì)合成的用于擴(kuò)增全套抗體重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的寡核苷酸引物，經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增VH和VΚ基因，將其先后克隆入噬菌粒展示表達(dá)載體pSEX81，電穿孔轉(zhuǎn)化大腸桿菌XL1-Blue，構(gòu)建scFv文庫；測定了文庫的庫容量和BstNI酶切單個(gè)克隆分析文庫的多樣性，...

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
縮略詞表
前言
實(shí)驗(yàn)材料
第一部分 抗KGla細(xì)胞噬菌體展示抗體文庫的構(gòu)建和鑒定
    實(shí)驗(yàn)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
第二部分 特異性單鏈抗體的分離、鑒定和結(jié)構(gòu)分析
    實(shí)驗(yàn)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
第三部分 可溶性單鏈抗體的表達(dá)、純化和功能分析
    實(shí)驗(yàn)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
第四部分 KGla細(xì)胞cDNA文庫的構(gòu)建和表達(dá)篩選
    實(shí)驗(yàn)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
討論
小結(jié)與結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    1 噬菌體展示技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用
    2 選擇感染性噬菌體(SIP)技術(shù)：一種新的相互作用分子篩選技術(shù)
志謝
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本文編號：3812509