2005年,Allander從患有呼吸道感染疾病的幼兒鼻咽物中鑒定出一種未知的DNA病毒,通過對這一新發(fā)現(xiàn)的病毒進行序列分析,發(fā)現(xiàn)該病毒基因組序列同博卡病毒屬的牛細小病毒（bovine parvovirus, BPV）和犬細小病毒（minute virus of canines, MVC）基因組序列有較高的同源性,因此該病毒被命名為人博卡病毒（Human Bocavirus, HBoV）。隨后,其他研究者又分離鑒定出另外三種人博卡病毒基因型,分別為HBoV2,3和4。人博卡病毒是繼細小病毒B19之后,第二種能對人類致病的細小病毒,該病毒通常在急性呼吸道感染的兒童患者鼻咽物中檢測到,世界范圍內(nèi)均有廣泛的流行病學報道,檢出率一般介于2-19%。HBoV1易同多種常見的呼吸道病毒共感染,被認為是兩歲以下兒童呼吸道病毒感染疾病中,繼呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial virus, RSV）、腺病毒（adenovirus, ADV）和鼻病毒（rhinovirus, RhV）之后,第四種重要的病毒感染源。同其它細小病毒類似,HBoV1是小DNA分子病毒,基因組全... 

【文章來源】：華中師范大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 引言
    1.2 人類博卡病毒的發(fā)現(xiàn)和分類
    1.3 人類博卡病毒流行病學研究
        1.3.1 人博卡病毒在世界范圍廣泛感染
        1.3.2 人博卡病毒與呼吸道病毒共感染
        1.3.3 人博卡病毒感染的臨床癥狀
    1.4 博卡病毒分子生物學研究進展
        1.4.1 人博卡病毒具有獨特的末端結構
        1.4.2 博卡病毒主要基因的功能研究
        1.4.3 博卡病毒感染引起細胞DNA損傷反應
    1.5 ALI培養(yǎng)系統(tǒng)簡介
    1.6 研究目的和意義
第二章 人類博卡病毒HBOV1全基因組克隆的構建
    2.1 材料與方法
        2.1.1 載體與菌株
        2.1.2 主要試劑與儀器
        2.1.3 病毒樣品獲取以及病毒DNA的提取
        2.1.4 PCR擴增
        2.1.5 PCR產(chǎn)物純化
        2.1.6 pBB載體改造
        2.1.7 克隆鑒定及質(zhì)粒小提和中提
    2.2 結果
        2.2.1 HBoV1全基因組克隆的構建策略
        2.2.2 HBoV1基因組左側發(fā)夾結構的克隆
        2.2.3 HBoV1基因組右側發(fā)夾結構的克隆
        2.2.4 HBoV1全基因組的克隆
    2.4 討論
第三章 反向遺傳系統(tǒng)生成HBOV1
    3.1 材料與方法
        3.1.1 細胞系
        3.1.2 試劑和儀器
        3.1.3 脂質(zhì)體介導的轉染
        3.1.4 Southern Blot分析
        3.1.5 氯化銫梯度離心及樣品收集
        3.1.6 Q-PCR檢測
        3.1.7 電鏡觀察
    3.2 結果
        3.2.1 HBoV1全基因組克隆可在HEK293復制
        3.2.2 HBoV1非結構蛋白影響病毒復制
        3.2.3 氯化銫梯度離心純化制備HBoV1
        3.2.4 電鏡觀察HBoV1病毒粒子
    3.3 討論
第四章 HBOV1感染模型的建立
    4.1 材料與方法
        4.1.1 細胞系和原代細胞
        4.1.2 試劑和儀器
        4.1.3 病毒感染
        4.1.4 Q-PCR
        4.1.5 TEER檢測
        4.1.6 間接免疫熒光檢測
        4.1.7 組織學分析
        4.1.8 Western Blot檢測
    4.2 結果
        4.2.1 HBoV1感染primary HAE
        4.2.2 HBoV1感染primary HAE生成子代病毒
        4.2.3 HBoV1感染破壞primary HAE緊密連接屏障
        4.2.4 HBoV1感染引起primary HAE纖毛脫落
        4.2.5 幾種常見呼吸道上皮細胞系不支持HBoV1復制
        4.2.6 HBoV1可感染CuFi-HAE
        4.2.7 HBoV1感染CuFi-HAE導致?lián)p傷
    4.3 討論
第五章 HBOV1在PRIMARY HAE中高效復制
    5.1 材料與方法
        5.1.1 原代細胞
        5.1.2 試劑和儀器
        5.1.3 病毒感染
        5.1.4 Q-PCR
        5.1.5 TEER檢測
        5.1.6 間接免疫熒光分析
        5.1.7 組織學分析
    5.2 結果
        5.2.1 HBoV1高效感染primary HAE并產(chǎn)生子代病毒
        5.2.2 極低MOI的HBoV1感染仍可破壞primary HAE
        5.2.3 HBoV1可從ALI下層感染primary HAE
    5.3 討論
參考文獻
附錄Ⅰ HBOV1 SALVADOR分離株全序列（JQ923422）
攻讀博士學位期間論文發(fā)表情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]兒童急性呼吸道博卡病毒感染[J]. 瞿小旺,漆正宇,段招軍,劉勁松,劉巧突,劉文培,黃燦平,謝志萍,彭夫望,高寒春,鄭麗舒,侯云德.  病毒學報. 2006(02)
[2]粵東地區(qū)細支氣管炎患兒中人偏肺病毒和人博卡病毒的檢出[J]. 林廣裕,朱玲,林創(chuàng)興,吳揚,周仁彬,周曉華,馬廉,陸學東.  中華兒科雜志. 2009 (04)



本文編號：3161338