第一部分抗人iASPP單克隆抗體的制備及研究應(yīng)用實(shí)驗(yàn)?zāi)康?應(yīng)用脾臟內(nèi)注射真核iASPP-SV表達(dá)質(zhì)粒免疫的方法制備抗人iASPP單克隆抗體（McAb）,并對其生物學(xué)特性進(jìn)行初步研究。實(shí)驗(yàn)方法:RT-PCR方法克隆iASPP-SV編碼區(qū)cDNA。將擴(kuò)增所得到的全長基因克隆到真核表達(dá)載體pcDNA3.1（+）中,并將iASPP-SV基因全長和基因片段克隆到原核表達(dá)載體pET28a中。誘導(dǎo)PIAF和PIAS載體在大腸桿菌Rosseta（DE3）中表達(dá)PIAF和PIAS蛋白。通過鹽酸胍變性溶解包涵體,并經(jīng)鎳柱純化得到重組PIAF和PIAS蛋白。采用脾臟內(nèi)注射真核pcDNA3.1-iASPP-SV（CIAF）免疫Balb/c小鼠3天后,取小鼠脾臟與小鼠骨髓瘤細(xì)胞（NS1）用傳統(tǒng)的淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備抗人iASPP單克隆抗體。應(yīng)用原核表達(dá)的iASPP-SV全長及iASPP-SV片段His-tag融合蛋白進(jìn)行間接ELISA法篩選陽性克隆。并對亞克隆后的陽性雜交瘤細(xì)胞株所制備的抗體的生物學(xué)功能進(jìn)行了初步鑒定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:我們利用RT-PCR方法從人白血病細(xì)胞系U-937中克隆出癌基因iASPP-SV編... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

iASPP一SV的克隆

PIAS質(zhì)粒EeoRI

工AF質(zhì)粒EcoRI和


本文編號：3013711