目的探討不同低氧濃度對人臍帶間充質(zhì)干細胞（hUCMSCs）誘導(dǎo)分化成神經(jīng)細胞的促進作用。方法hUCMSCs分為對照組（常氧濃度）和實驗組（5%氧濃度組、10%氧濃度組）。MTT法檢測細胞增殖;乳酸脫氫酶（LDH）法檢測細胞損傷;流式細胞儀檢測細胞凋亡; Weston Blot檢測細胞神經(jīng)生長因子（NGF）、神經(jīng)巢蛋白（Nestin）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）的表達。結(jié)果 hUCMSCs細胞在缺氧條件下細胞增殖受到抑制,培養(yǎng)24 h內(nèi)實驗組OD值顯著低于對照組（P <0. 05）,隨著培養(yǎng)時間的延長,實驗組細胞增殖加快,到培養(yǎng)至96 h時實驗組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P> 0. 05）。在培養(yǎng)24、48 h時,實驗組hUCMSCs細胞LDH活性顯著高于對照組（P <0. 05）;培養(yǎng)至72 h后5%氧濃度組LDH活性顯著高于對照組（P <0. 05）,10%氧濃度組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0. 05）;培養(yǎng)至96 h后各組hUCMSCs細胞LDH的活性比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P> 0. 05）。5%氧濃度組hUCMSCs細胞抗凋亡作... 

【文章來源】：解放軍醫(yī)藥雜志. 2019,31(08)

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各組人臍帶間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)96h后凋亡細胞率對照組10%氧濃度組5%氧濃度組

96h后hUCMSCs細胞經(jīng)流式細胞儀檢測，各組凋亡細胞率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)。見圖1。1%低氧培養(yǎng)12h時誘導(dǎo)hUCMSCs凋亡，5%氧濃度組、10%氧濃度組凋亡細胞率低于對照組(P＜0．05);缺氧培養(yǎng)的實驗組(5%氧濃度組、10%氧濃度組)細胞具有抗細胞凋亡作用，5%氧濃度組抗凋亡作用強于10%氧濃度組(P＜0．05)。見圖2。對照組10%氧濃度組5%氧濃度組96%h圖1各組人臍帶間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)96h后凋亡細胞率誘導(dǎo)凋亡對照組10%氧濃度組5%氧濃度組圖2各組人臍帶間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)凋亡后凋亡細胞率2.4神經(jīng)細胞誘導(dǎo)分化加入成神經(jīng)細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)的第3天，5%低氧培養(yǎng)組的hUCMSCs細胞增殖·8·解放軍醫(yī)藥雜志2019年8月第31卷第8期Med＆PharmJChinPLA，Vol．31，No．8，August．2019

質(zhì)收縮，折光性增強。10%低氧培養(yǎng)組和對照組的hUCMSCs細胞未見明顯異常。誘導(dǎo)培養(yǎng)的第5天，5%低氧培養(yǎng)組hUCMSCs細胞為長梭形，胞質(zhì)和胞核偏向細胞一側(cè)，有雙極或多極突起，突起細而長，末端分叉，具有典型的神經(jīng)元樣形態(tài);有少量hUCMSCs細胞死亡，脫落呈圓球型的漂浮細胞。10%低氧培養(yǎng)組hUC-MSCs細胞形態(tài)開始發(fā)生變化，胞質(zhì)收縮。對照組hUCMSCs細胞形態(tài)未見明顯異常，但細胞開始呈分散狀態(tài)生長。見圖3。誘導(dǎo)培養(yǎng)第3天誘導(dǎo)培養(yǎng)第5天對照組10%氧濃度組5%氧濃度組圖3各組人臍帶間充質(zhì)干細胞成神經(jīng)誘導(dǎo)后細胞形態(tài)變化2.5各組hUCMSCs中神經(jīng)元相關(guān)蛋白的表達成神經(jīng)誘導(dǎo)第5天時，5%氧濃度組和10%氧濃度組hUCMSCs細胞中NGF、Nestin、NSE的表達顯著高于對照組(P＜0．05)。見圖4。240%KD140%KD78%KD42%KDNestinNGFNSEActin對照組5%氧濃度組10%氧濃度組圖4各組人臍帶間充質(zhì)干細胞細胞神經(jīng)元相關(guān)蛋白的表達檢測NGF為神經(jīng)生長因子，NSE為神經(jīng)元特異性烯醇化酶，Nestin為神經(jīng)巢蛋白3討論hUCMSCs是一種存于胚胎組織廢棄物———臍帶華通膠中的干細胞，來源于發(fā)育早期由中胚層，形態(tài)和生物學(xué)特性與骨髓間充質(zhì)干細胞相似，可以跨胚層誘導(dǎo)分化為骨、軟骨、真皮組織、骨骼肌、心肌細胞及神經(jīng)元等多種類型細胞［5-6］，在組織再生和創(chuàng)傷修復(fù)等方面具有重要作用。目前國內(nèi)外多家干細胞治療中心已開展了hUCMSCs治療帕金森病、脊髓損傷、腦癱、多發(fā)性硬化、老年癡呆、脊髓小腦共濟失調(diào)等神經(jīng)系統(tǒng)疾病的臨床研究。在正常的生理狀態(tài)下，人體大部分組織

【參考文獻】：
期刊論文
[1]palliative care and end-stage colorectal cancer management:The surgeon meets the oncologist[J]. Renato Costi,Francesco Leonardi,Daniele Zanoni,Vincenzo Violi,Luigi Roncoroni.  World Journal of Gastroenterology. 2014(24)
[2]人臍帶間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)、鑒定及其誘導(dǎo)分化的研究[J]. 王曉輝,惠玲,楊霄鵬,王鯤,楊雯,哈小琴.  解放軍醫(yī)藥雜志. 2013(10)



本文編號：3005772