目的建立胰高血糖素樣肽-1（glucagon-like peptide-1,GLP-1）融合蛋白（GLP1-Fc）生物學(xué)活性熒光素酶報告基因測定方法,并進行驗證。方法采用電穿孔法將GLP-1受體（GLP-1R）表達載體和cAMP反應(yīng)元件（cAMP response element,CRE）報告基因共轉(zhuǎn)染入HEK-293細胞中,通過加入潮霉素B篩選和單克隆培養(yǎng),獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的單克隆細胞株;采用藥物敏感的細胞株建立報告基因生物學(xué)活性測定方法,并對方法進行優(yōu)化及驗證。結(jié)果篩選出GLP-1-Fc活性檢測細胞株293-GLP-1R/CRE,該細胞較合適的活性檢測參數(shù)為每孔接種20 000個細胞,培養(yǎng)10～15 h,利拉魯肽的起始濃度為10 mg/L,作用時間5 h。采用建立的方法檢測不同效價利拉魯肽樣品相對生物學(xué)活性的回收率在（90. 43±3. 29）%～（99. 87±5. 34）%之間,利拉魯肽（標準品）與樣品6次測定的EC50的CV值分別為2%和3%,二者無差異。結(jié)論建立了快速、精確的測定GLP1-Fc生物學(xué)活性的方法,為GLP-1相關(guān)的藥效指標評價提供了更加客觀、全面的手段。 

【文章來源】：中國生物制品學(xué)雜志. 2019,32(08)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細胞、質(zhì)粒及菌株
    1.2 主要試劑
    1.3 菌株轉(zhuǎn)化及質(zhì)粒提取
    1.4 穩(wěn)定細胞株的構(gòu)建
    1.5 細胞篩選
    1.6 熒光素酶活性檢測
    1.7 活性檢測方法的優(yōu)化
    1.8 數(shù)據(jù)處理
    1.9 方法的驗證
        1.9.1 準確性
        1.9.2 線性
        1.9.3 精密性
2 結(jié)果
    2.1 GLP-1-FC活性細胞株的篩選
    2.2 活性檢測方法的建立
    2.3 活性檢測方法的優(yōu)化
        2.3.1 細胞培養(yǎng)時間
        2.3.2 細胞接種密度
        2.3.3 藥物作用時間
        2.3.4 細胞代次
    2.4 方法的驗證
        2.4.1 準確性
        2.4.2 線性
        2.4.3 精密性
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]基于胰高血糖素類肽-1受體的2型糖尿病治療藥物研究進展[J]. 張慧敏,林琳,陳媛媛,林忠,杜有功,蔣正立.  中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué). 2015(06)
[2]胰高血糖素樣肽-1受體激動劑在神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療中的研究進展[J]. 印蕾,王影,陳松,高向東.  中國藥科大學(xué)學(xué)報. 2014(04)
[3]穩(wěn)定表達CRFR1的HEK293細胞株建立與功能鑒定[J]. 葛治娟,于金梅,馬曉蕓,劉曉燕,鄭建全.  中國藥理學(xué)通報. 2014(08)



本文編號：2986817