發(fā)布時(shí)間：2021-01-19 10:25

　　目的建立胰高血糖素樣肽-1（glucagon-like peptide-1,GLP-1）融合蛋白（GLP1-Fc）生物學(xué)活性熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定方法,并進(jìn)行驗(yàn)證。方法采用電穿孔法將GLP-1受體（GLP-1R）表達(dá)載體和cAMP反應(yīng)元件（cAMP response element,CRE）報(bào)告基因共轉(zhuǎn)染入HEK-293細(xì)胞中,通過加入潮霉素B篩選和單克隆培養(yǎng),獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的單克隆細(xì)胞株;采用藥物敏感的細(xì)胞株建立報(bào)告基因生物學(xué)活性測(cè)定方法,并對(duì)方法進(jìn)行優(yōu)化及驗(yàn)證。結(jié)果篩選出GLP-1-Fc活性檢測(cè)細(xì)胞株293-GLP-1R/CRE,該細(xì)胞較合適的活性檢測(cè)參數(shù)為每孔接種20 000個(gè)細(xì)胞,培養(yǎng)10～15 h,利拉魯肽的起始濃度為10 mg/L,作用時(shí)間5 h。采用建立的方法檢測(cè)不同效價(jià)利拉魯肽樣品相對(duì)生物學(xué)活性的回收率在（90. 43±3. 29）%～（99. 87±5. 34）%之間,利拉魯肽（標(biāo)準(zhǔn)品）與樣品6次測(cè)定的EC50的CV值分別為2%和3%,二者無差異。結(jié)論建立了快速、精確的測(cè)定GLP1-Fc生物學(xué)活性的方法,為GLP-1相關(guān)的藥效指標(biāo)評(píng)價(jià)提供了更加客觀、全面的手段。 

【文章來源】：中國(guó)生物制品學(xué)雜志. 2019,32(08)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞、質(zhì)粒及菌株
    1.2 主要試劑
    1.3 菌株轉(zhuǎn)化及質(zhì)粒提取
    1.4 穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建
    1.5 細(xì)胞篩選
    1.6 熒光素酶活性檢測(cè)
    1.7 活性檢測(cè)方法的優(yōu)化
    1.8 數(shù)據(jù)處理
    1.9 方法的驗(yàn)證
        1.9.1 準(zhǔn)確性
        1.9.2 線性
        1.9.3 精密性
2 結(jié)果
    2.1 GLP-1-FC活性細(xì)胞株的篩選
    2.2 活性檢測(cè)方法的建立
    2.3 活性檢測(cè)方法的優(yōu)化
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間
        2.3.2 細(xì)胞接種密度
        2.3.3 藥物作用時(shí)間
        2.3.4 細(xì)胞代次
    2.4 方法的驗(yàn)證
        2.4.1 準(zhǔn)確性
        2.4.2 線性
        2.4.3 精密性
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于胰高血糖素類肽-1受體的2型糖尿病治療藥物研究進(jìn)展[J]. 張慧敏,林琳,陳媛媛,林忠,杜有功,蔣正立.  中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué). 2015(06)
[2]胰高血糖素樣肽-1受體激動(dòng)劑在神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療中的研究進(jìn)展[J]. 印蕾,王影,陳松,高向東.  中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(04)
[3]穩(wěn)定表達(dá)CRFR1的HEK293細(xì)胞株建立與功能鑒定[J]. 葛治娟,于金梅,馬曉蕓,劉曉燕,鄭建全.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2014(08)



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