結(jié)核病是目前世界范圍內(nèi)流行范圍最廣、致死率最高的的傳染性疾病之一。全球每年新增近千萬感染者,并造成近百萬人死亡。結(jié)核分枝桿菌是結(jié)核病的致病菌,它能夠產(chǎn)生多種致病因子,具有強(qiáng)致病性；同時具有多重耐藥性和免疫逃逸能力,對寄生環(huán)境有極強(qiáng)的適應(yīng)能力。因此,結(jié)核分枝桿菌一直都是對人類健康威脅最大的致病菌之一。近年來,對結(jié)核分枝桿菌致病性和耐藥性的研究取得了較大的進(jìn)展,越來越多與之相關(guān)的蛋白被發(fā)現(xiàn)。在本論文中,我們對分枝桿菌致病因子分泌系統(tǒng)ESX-1的調(diào)節(jié)蛋白MycP1以及結(jié)核分枝桿菌外膜蛋白RV1698開展結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究,用X-射線晶體衍射方法解析了它們的三維結(jié)構(gòu),并探究了結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系,初步闡釋了這兩個蛋白質(zhì)在分枝桿菌致病過程中的作用機(jī)制。本論文的第一部分是分枝桿菌ESX-1分泌系統(tǒng)調(diào)節(jié)蛋白MycP1的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究。結(jié)核分枝桿菌中存在一種新型分泌系統(tǒng)T7SS （Type Ⅶ secretion system,）, ESX-1系統(tǒng)就是一種典型的T7SS,也是分枝桿菌中研究最廣泛的分泌系統(tǒng)。ESX-1分泌系統(tǒng)是分枝桿菌致病性的決定因素之一,致病性分枝桿菌在感染宿主細(xì)胞的過程中會通過ESX-... 

【文章來源】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 結(jié)核病與結(jié)核分枝桿菌
    1.2 結(jié)核分枝桿菌桿菌外膜結(jié)構(gòu)與外膜蛋白
        1.2.1 分枝桿菌具有復(fù)雜的包膜結(jié)構(gòu)
        1.2.2 分枝桿菌的外膜體系
        1.2.3 基于膜孔蛋白的跨膜通路
        1.2.4 分枝桿菌外膜蛋白的結(jié)構(gòu)
    1.3 結(jié)核分枝桿菌的ESX-1分泌系統(tǒng)
        1.3.1 革蘭氏陰性菌的分泌系統(tǒng)
        1.3.2 結(jié)核分枝桿菌中的T7SS/ESX-1分泌系統(tǒng)
        1.3.3 ESX-1分泌系統(tǒng)的作甩機(jī)制
        1.3.4 ESX-1分泌系統(tǒng)與結(jié)核分枝桿菌的致病性
        1.3.5 ESX-1分泌系統(tǒng)的調(diào)控機(jī)制
第二章 結(jié)核分枝桿菌ESX-1分泌系統(tǒng)調(diào)節(jié)蛋白MycP1的結(jié)構(gòu)與功能研究
    2.1 研究背景
    2.2 實驗材料與方法
        2.2.1 MycP1、MycP1突變體及EspB蛋白表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2.2 蛋白表達(dá)與純化
        2.2.3 蛋白晶體生長、數(shù)據(jù)采集與結(jié)構(gòu)解析
        2.2.4 EspB蛋白的體外酶切實驗
        2.2.5 MycP1的分子動力學(xué)模擬
    2.3 實驗結(jié)果與討論
24-422蛋白的序列分析">        2.3.1 MycP1^24-422蛋白的序列分析
24-422蛋白的表達(dá)和純化">        2.3.2 MycP1^24-422蛋白的表達(dá)和純化
24-422蛋白的晶體結(jié)構(gòu)">        2.3.3 MycP1^24-422蛋白的晶體結(jié)構(gòu)
24-422蛋白的活性中心與底物結(jié)合口袋">        2.3.4 MycP1^24-422蛋白的活性中心與底物結(jié)合口袋
24-422蛋白的propeptide是無序的loop結(jié)構(gòu)">        2.3.5 MycP1^24-422蛋白的propeptide是無序的loop結(jié)構(gòu)
24-422蛋白的表達(dá)和純化">        2.3.6 MycP1^24-422蛋白的表達(dá)和純化
63-422蛋白的晶體結(jié)構(gòu)">        2.3.7 MycP1^63-422蛋白的晶體結(jié)構(gòu)
        2.3.8 MycP1對底物蛋白EspB的酶切
        2.3.9 “propeptide”對MycP1蛋白分子構(gòu)象穩(wěn)定性的影響
    2.4 本章小結(jié)
第三章 結(jié)核分枝桿菌外膜蛋白Rv1698的結(jié)構(gòu)與功能研究
    3.1 研究背景
    3.2 實驗材料與方法
        3.2.1 Rv1698及其突變體表達(dá)載體構(gòu)建
        3.2.2 蛋白表達(dá)與純化
27-314蛋白晶體生長、數(shù)據(jù)采集與結(jié)構(gòu)解析">        3.2.3 Rv1698^27-314蛋白晶體生長、數(shù)據(jù)采集與結(jié)構(gòu)解析
        3.2.4 分析型超速離心實驗
FL蛋白負(fù)染電鏡樣品制備及數(shù)據(jù)采集">        3.2.5 Rv1698_FL蛋白負(fù)染電鏡樣品制備及數(shù)據(jù)采集
        3.2.6 恥垢分枝桿菌表達(dá)體系
    3.3 實驗結(jié)果與討論
        3.3.1 Rv1698蛋白的序列分析
        3.3.2 Rv1698的水溶性特征
        3.3.3 Rv1698的整體結(jié)構(gòu)
        3.3.4 Rv1698蛋白的膜定位及寡聚化
        3.3.5 Rv1698多聚體模型的構(gòu)建
    3.4 本章小結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與取得的其他研究成果



本文編號：2977967