發(fā)布時(shí)間：2021-01-07 05:38

　　最近研究表明MSC能抑制細(xì)胞或有絲分裂原引起的T細(xì)胞增殖，雖然MSC對T細(xì)胞具有直接的負(fù)調(diào)控能力，但MSC對免疫反應(yīng)的始動(dòng)者DC是否也具有免疫調(diào)控作用國內(nèi)外均未見報(bào)道。本課題就此展開深入探討。 首先，從人骨髓中分離培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cell，MSC），并從形態(tài)、表型和分化功能三個(gè)方面進(jìn)行鑒定。通過混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)和淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)證明MSC可抑制異體T細(xì)胞的增殖，且隨MSC的量的增加，這種抑制能力增強(qiáng)。其次，利用免疫磁珠法從外周血分離CD14+單核細(xì)胞，GM-CSF+IL-4+TNF-α誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC），同樣從形態(tài)、表型和功能三個(gè)方面鑒定。最后，探討MSC對DC生物學(xué)特性的影響，結(jié)果表明MSC抑制DC的發(fā)育、成熟和功能。在DC的誘導(dǎo)體系中，MSC抑制CD14+單核細(xì)胞向DC的分化。細(xì)胞間接觸和可溶性分子均參與MSC對DC發(fā)育的負(fù)調(diào)控，且細(xì)胞間接觸發(fā)揮更大作用。進(jìn)一步，利用中和實(shí)驗(yàn)探討對DC生成起重要作用的IL-6和M-CSF在有MSC參與的共培養(yǎng)體系中的作用。結(jié)果表明，雖然MSC分泌IL-6和M-CSF，但中... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

MSC細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果

MSC的免疫組化特征為纖維連接蛋白(Fibroneetin)、層粘連蛋白(Laminin)、波形蛋白(Vimentin)為陽性，vWF、平滑肌動(dòng)蛋白(SmoothMuscleAetin)、結(jié)蛋白(Desmin)為陰性，見圖1一8。二、MSC的多向分化特性1.成脂肪誘導(dǎo)在含10%FBS高糖DMEM中，加入地塞米松1pM、消炎痛加0pM、IBMXo.smM、胰島素10pg/ml的成脂肪誘導(dǎo)體系中培養(yǎng)3d，細(xì)胞由成纖維細(xì)胞樣逐漸收縮變短，成為立方形或多角形;連續(xù)培養(yǎng)7d，鏡下可見細(xì)胞內(nèi)有微小脂滴出現(xiàn)，隨著時(shí)間的延長，脂滴逐漸增大融合，培養(yǎng)Zw時(shí)，可見融合成團(tuán)的脂滴充滿整個(gè)細(xì)胞，誘導(dǎo)Zw后用油紅O染色

性磷酸酶染色，呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，達(dá)到95%以上。成骨誘導(dǎo)Zw，細(xì)胞基質(zhì)中就可見鈣沉積，逐漸出現(xiàn)礦化物，至4w時(shí)己形成鈣化結(jié)節(jié)，vonKossa染色可將骨結(jié)節(jié)中沉積的鈣染成黑色(圖1一10)。成骨細(xì)胞特異性的表達(dá)OsteoPontin，Msc誘導(dǎo)10d，提取總RNA進(jìn)行Rl七pCR，結(jié)果顯示，OsteoPoniin可被明顯地檢測到，而在未經(jīng)誘導(dǎo)的細(xì)胞中則沒有這種特異性產(chǎn)物表達(dá)(圖1一12)。圖1一10Ms藻奔再而麗葬麗{正常Msc為梭形(A)，誘導(dǎo)lw，細(xì)胞形態(tài)改變(B)，原位染色顯示堿性磷酸酶陽性(C)

【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療狼瘡性腎炎的臨床療效研究[D]. 周欣諭.福建醫(yī)科大學(xué) 2016



本文編號：2962014