發(fā)布時(shí)間：2020-12-27 15:11

　　目的： 以IL-12作為分子佐劑，與結(jié)核桿菌新抗原Mtb8.4基因連接形成嵌合分子，將其克隆到真核表達(dá)質(zhì)粒中，構(gòu)建成嵌合DNA疫苗，研究其在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答的效果及對(duì)C57BL／6N小鼠的免疫保護(hù)作用，為尋求安全、有效、廉價(jià)的結(jié)核病新疫苗打下基礎(chǔ)。 方法： 1．Mtb8.4真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定：用PCR方法從結(jié)核桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv基因組中擴(kuò)增出Mtb8.4基因（包含或不含信號(hào)肽），亞克隆入真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1（+），構(gòu)建成重組質(zhì)粒pcDNA3.1（+）-Mtb8.4（pM）或pcDNA3.1（+）-MS（pMS），用酶切、PCR和DNA序列分析進(jìn)行鑒定。 2．Mtb8.4／hIL-12嵌合質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定：先以pM和pMS重組質(zhì)粒為模板，用PCR方法擴(kuò)增出帶有接頭（linker）的Mtb8.4基因（Mtb8.4-linker和MS-linker，無(wú)終止密碼），亞克隆入真核表達(dá)質(zhì)粒pCI-neo中，構(gòu)建成重組質(zhì)粒pCI-neo-Mtb8.4-linker（pML）和pCI-neo-MS-linker（pMSL）；再以pORF-hIL12質(zhì)粒為... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：149 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

Mtbs.4墓因PCRFigl寸.PCRPduetof

L助e1CODtt勺lLane2PCRProductofMt.Mtbs.4gene圖1一2Mtbs.4墓因PCR擴(kuò)增圖Figl寸.PCRProduetofMt.袱bs·4gene(二)結(jié)核分枝桿菌MS基因(包含信號(hào)膚的Mths.4)的PCR擴(kuò)增:以結(jié)核桿菌H37Rv基因組DNA為模板，P3和PZ為引物，所得PCR產(chǎn)物3pl在1.7%瓊脂糖凝膠中電泳，結(jié)果顯示，擴(kuò)增出約360bP的片段，與預(yù)期的MS目的基因大小相符，見圖1一3。LaneMPUC19DNAIM勸1markerLane1and2PCRProductofMt.MSgeneL階e3Control圖1一3MS基因PCR擴(kuò)增圖Figl一PCRProduetofMLMSgene(三)peDNA3.l(+)一Mtbs.4(pM)重組質(zhì)粒的鑒定:1.PCR鑒定:以pM重組質(zhì)粒為模板，Pl、PZ為引物，擴(kuò)增出約273bP的目的基因片段

peDNA3.i(+)一Mtbs.4

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基因免疫研究中的一些新動(dòng)態(tài)[J]. 熊思東,徐薇.  國(guó)外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊(cè)). 2001(01)



本文編號(hào)：2941968