人免疫缺陷病毒（HIV）感染所引起的艾滋病由于其高度的危害性而受到人們的廣泛關(guān)注，早期診斷迫在眉睫。艾滋病的診斷不僅需要檢測到HIV的存在，并對其進(jìn)行基因分型，而且也要對艾滋病發(fā)病過程中合并的感染進(jìn)行監(jiān)測。近年來國際上興起的一種基因檢測新技術(shù)——DNA芯片技術(shù)，為艾滋病的早期診斷提供了一種快速、高效、敏感、經(jīng)濟(jì)、自動化的方法，可以同時(shí)進(jìn)行HIV基因的檢測和分型。 DNA芯片技術(shù)是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸探針或者直接將大量DNA探針以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后與標(biāo)記的樣品雜交，通過對雜交信號的檢測分析，得出樣品的基因序列及其表達(dá)的信息。DNA芯片可分為原位合成芯片和DNA微集陣列兩大類，其中DNA微集陣列的制作未受到嚴(yán)格的專利保護(hù)，因此為眾多的研究機(jī)構(gòu)所推崇而發(fā)展迅速。DNA微集陣列技術(shù)的關(guān)鍵是探針的制備與樣品的標(biāo)記、雜交。本文應(yīng)用馬文麗、鄭文嶺等建立的限制性顯示（Restriction Display，簡稱為RD）技術(shù)，快速分離大量有序的基因片段制備DNA芯片探針；并將其巧妙地應(yīng)用于基因芯片的樣品標(biāo)記與雜交過程，大大提高了雜交的效率。 實(shí)驗(yàn)中首先利用... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：124 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

HIV-1四個(gè)亞型質(zhì)粒DNA的限制性酶切分析

2.RD圖譜以通用引物及延伸一個(gè)堿基的分組引物進(jìn)行n組RD反應(yīng)，各組產(chǎn)物各取2pl，進(jìn)行2%瓊脂糖電泳，可見清晰分辨的的RD圖譜(圖1一4)。其中通用引物組UU(第1道)中擴(kuò)增的條帶并不多。AA(第2道)、AC(第4道)、TT組(第6道)與預(yù)期大致相符;兩個(gè)大片段(Al’-1081、TT-1610)均未擴(kuò)增出來;而AT、TC組中出現(xiàn)幾條大小與TT組相近的片段;TG組理論上無片段，而出現(xiàn)的片段與TT組相似;AG、CC、CG、GG組隱約有幾條片段(注:圖中片段的大小減去32bp的接頭長等于預(yù)期片段長度)。以TT組為例，該組中自上至下有五條帶，以TTI一5表示。~2000~1000~750~500~250~100圖1一4HIVIU26942基因的RD圖譜Fig.1一4RDPatternofHIVgenesfromfoursubtyPes.l一11:PCRsubgrouPsofUU，AA、Al，、AC、AG、T’T、TC、TG、CC、CG、GG;M:DNAmarkerDL20OO.

3.克隆鑒定在涂有TT組轉(zhuǎn)化液的平板上，隨機(jī)挑選24個(gè)白色菌斑，PCR擴(kuò)增后，以2%瓊脂糖凝膠電泳，得到了TT組的各種片段(圖1一5):克隆片段13、14、15與TTI相似;20、21與TTZ對應(yīng);16、18等對應(yīng)TT3;11、12等對應(yīng)TT4;10對應(yīng)TTS。bPM101112131415161718192021刀23別200010000nU00氣Jn‘JO7者一、︺21圖1一5克隆片段的2%瓊脂糖凝膠電泳分析Fig.1一5TheZ%agarosegeleleetroPhoretieanalysisofeloningfragmentsamPlifiedbyPCR.10一24:elonenumbers:M:DNAmarkerDL200O4.RD片段的擴(kuò)增以B亞型TT、TC、AT、AC組的陽性克隆質(zhì)粒為模板，擴(kuò)增得到單一片段(圖1一6)。(a)MAAA】，OOC﹃日︺nn︸O︸I︶n︸︶Inz，了‘J21


本文編號：2941222