人乙肝病毒（Hepatitis B virus, HBV）引起人肝臟急慢性炎癥,最終導(dǎo)致肝纖維化（liver cirrhosis, LC）及肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）。目前對于HBV的致病和致癌機(jī)理還不是很清楚。為深入探討HBV的致病機(jī)理,采用基因芯片系統(tǒng)篩選了肝癌細(xì)胞系HepG2和整合了HBV全基因組的HepG2.2.15細(xì)胞系中差異表達(dá)基因,檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)載脂蛋白A1（ApoAl）和載脂蛋白B （ApoB）在HepG2.2.15中的表達(dá)明顯低于HepG2細(xì)胞,而載脂蛋白M （ApoM）在HepG2.2.15細(xì)胞表達(dá)升高,進(jìn)一步檢測了HBV患者和健康對照者ApoA1、ApoB、ApoE和ApoM的血清學(xué)水平。結(jié)果表明,HBV感染過程中ApoA1和ApoB的血清學(xué)水平水平顯著降低；而ApoM的血清學(xué)水平在HBV患者中顯著升高。為探討HBV調(diào)節(jié)ApoA1的機(jī)制,構(gòu)建了ApoA1基因啟動子熒光素酶的報(bào)告基因pApoA1-Luc,并采用RT-PCR和Western-blot檢測了HBV對ApoA1mRNA和蛋白表達(dá)的影響,結(jié)果顯示HBV能夠在啟動子、mR... 

【文章來源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

HBV的基因組結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物

同時(shí)擴(kuò)增cccDNA (圖2)。產(chǎn)生的子代雙鏈DNAI'〃4。基因組RM的合成結(jié)合宿主細(xì)胞受體后，通過膜融合過程，其核衣殼進(jìn)入轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核內(nèi)形成松他的環(huán)狀DNA (relaxed circularcDNA中連接在正鏈5 ‘端的RNA殘基和連接在負(fù)鏈5 ‘過DNA聚合酶催化正鏈被延長，且補(bǔ)齊DNA鏈中的缺)形成cccDNA。cccDNA是HBV前基因組合成前基因組板。前基因組RNA是病毒DNA基因組進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄的模板在核殼體內(nèi)進(jìn)行病毒DNA的復(fù)制[,5.鏈DNA的合成核殼體內(nèi)，DNA聚合酶能結(jié)合前基因組RNA的5 ‘端中基因組RNA上的S蓮環(huán)結(jié)構(gòu)序列為模板，先合成4個(gè)堿基核苷酸轉(zhuǎn)移至3 ‘端，互補(bǔ)結(jié)合在DR2區(qū)序列，并以前基后合成負(fù)鏈DNA。0000 cccDNA

脂蛋白A1啟動子的克隆研究中，用特異性引物，以人基因組DNA為模板進(jìn)行PCR，擴(kuò)片段即ApoAl基因啟動子pApoAl-Luc，將該啟動子克隆到pGL3載體中。載體圖譜如圖1-1所示。


本文編號：2941106