6A8 cDNA是本實驗室克隆到的，長3300bp，從57-3242bp為一開放閱讀框架，同源性分析高度提示6A8 cDNA編碼的蛋白質(zhì)可能是一種α-甘露糖苷酶。另外，用于克隆6A8 cDNA的單抗是用活的人B細胞3D5免疫小鼠，并用活3D5細胞作靶細胞篩選到的，因而提示6A8 cDNA編碼的蛋白質(zhì)可能也表達于細胞膜。本論文工作的目的就是：1)確證6A8蛋白質(zhì)為一種α-甘露糖苷酶；2)6A8蛋白質(zhì)在細胞中的定位，檢測它是否也表達于胞膜，是一種胞膜酶。 為了確證6A8蛋白質(zhì)的α-甘露糖苷酶本質(zhì)，我采用分子克隆重組技術(shù)將本室克隆到的3個6A8 cDNA片段連成一個完整的3300bp cDNA，經(jīng)測序完全正確，再將它插入真核表達載體pCDNA3中，在COS-7細胞中獲得瞬時表達。以野生型及轉(zhuǎn)染空載體的COS-7細胞作對照。觀察到轉(zhuǎn)染6A8 cDNA-pCDNA3的COS-7細胞蛋白勻漿上清液對p-nitrophenyl-α-D-mannopyranoside的酶解作用增強，且不被swainsonine抑制。用單抗6A8作探針行Western Blotting，見分子量為120KDa的蛋... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

.pBV220一6A8、pGEM一TEasy一6A8和pYEFP一Nl一6A8的酶切鑒定IdentifieationofPBV220一6A8、PGEM一TEasy一6A8andPEYFP一NI一6八8by

中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)切鑒定。pBV22O一6A8中的2908bp片段與pGKpnl/Trugl/ECoRI酶切后連接于pEYFP一NI中，鑒定。所連接的cDN八經(jīng)測序，表明符合6A8cMZ321MI

pCDNA3一6A8cDNA的酶切鑒定Fig6.IdentifieationofpCDNA3一6A8byrestrietionenzymes

【參考文獻】：
期刊論文
[1]6A8 cDNA編碼一種α-甘露糖苷酶[J]. 史耕先,馬鳳蓉,朱立平,張立新,趙方萄,劉音,王訊.  中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報. 1999(06)
[2]編碼與大鼠ERα-甘露糖苷酶同源的人6A8cDNA在真核細胞的表達[J]. 張立新,馬鳳蓉,朱立平,李波,石偉,張淑珍,李國燕,王汛,趙方萄.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 1998(04)
[3]一個與編碼大鼠ERα-甘露糖苷酶同源的人cDNA分子克隆[J]. 張立新,朱立平,石偉,馬鳳蓉,祝慶麟,張淑珍,王汛,李國燕.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 1997(01)



本文編號：2916554