目的探討弓形蟲ROP16_Ⅰ/Ⅲ蛋白對妊娠小鼠子宮基質(zhì)細胞蛻膜化的影響。方法原代培養(yǎng)小鼠子宮基質(zhì)細胞,用雌二醇、孕酮和cAMP體外誘導(dǎo)蛻膜化的同時加入ROP16重組慢病毒,72 h后qRT-PCR檢測蛻膜化標(biāo)志物催乳素（PRL）mRNA的表達,流式細胞術(shù)檢測蛻膜細胞凋亡率的變化,并用Western blot檢測細胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax的表達水平。結(jié)果提取的小鼠子宮基質(zhì)細胞純度為95%以上,在體外誘導(dǎo)蛻膜化后,PRL mRNA的表達隨時間延長而顯著升高（P<0.05）,在誘導(dǎo)的蛻膜細胞中過表達ROP16_Ⅰ/Ⅲ,相比于對照組,蛻膜細胞的凋亡率降低（P<0.01）,凋亡蛋白Bax表達降低,Bcl-2蛋白表達上調(diào)。結(jié)論弓形蟲ROP16_Ⅰ/Ⅲ蛋白會抑制蛻膜細胞的凋亡,可能會影響蛻膜細胞增殖與凋亡的平衡,從而影響胚胎的植入。 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2019年10期 北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞的鑒定×200A:熒光顯微鏡下觀察間質(zhì)細胞標(biāo)志物Vimentin蛋白;B:熒光顯微鏡下觀察DAPI染色的細胞核;C:合并觀察計數(shù)波形蛋白陽性細胞數(shù)與

圖4各組基質(zhì)細胞感染不同ＲOP16Ⅰ/Ⅲ慢病毒的凋亡率A:ＲOP16Ⅰ/Ⅲ慢病毒轉(zhuǎn)染組;B:陰性對照病毒組;C:對照組;D:各組凋亡率;與空載組比較:＊＊P＜0.01;與對照組比較:##P＜0.01圖5Westernblot法檢測Bax和Bcl-2表達與空載組比較:*P＜0.05;與對照組比較:#P＜0.05劇烈的增殖和分化，這種變化會逐漸延伸到整個子宮內(nèi)膜。這些變化統(tǒng)稱為子宮蛻膜化。子宮內(nèi)膜進行蛻膜化的過程中，首先與子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞的正常增殖密切相關(guān)［7］。當(dāng)胚泡附著在子宮內(nèi)膜上皮時，在附著位置周圍的內(nèi)膜上皮細胞會發(fā)生凋亡，而鄰近的基質(zhì)細胞則會進行廣泛的增殖，增殖的基質(zhì)細胞獲得多倍性而分化成特殊的細胞類型，此時基質(zhì)細胞會向著床位點周圍擴展，逐步形成成熟的蛻膜細胞，然后隨著胚泡的植入，又會按照相同的趨勢持續(xù)退化和凋亡［8］，并被周圍的滋養(yǎng)層或巨噬細胞吞噬［9］。因為有了蛻膜化過程中細胞有序的增殖和退化，使胚泡周圍的蛻膜細胞的數(shù)量得以控制，所以控制了滋養(yǎng)細胞的侵襲。在此過程中，小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞經(jīng)歷了形態(tài)學(xué)和分子水平的獨特變化［10］。蛻膜化過程中，著床位點的蛻膜細胞停止增殖，終末分化后形成的區(qū)域稱之為初級蛻膜區(qū)，第2次分化形成的區(qū)域稱之為次級蛻膜區(qū)，最后次級蛻膜區(qū)的細胞也會發(fā)生凋亡，使著床位點的腔隙增大以便容納生長的胚胎［11］。在本實驗中，在孕鼠胚胎著床的時間段成功分離培養(yǎng)了子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞，在體外培養(yǎng)的小鼠子宮基質(zhì)細胞中過表達ＲOP16Ⅰ/Ⅲ蛋白，并體外誘導(dǎo)蛻膜化時，結(jié)果顯示ＲOP16Ⅰ/Ⅲ蛋白上調(diào)了蛻膜細胞Bcl-2的表達并降低了Bax表達，抑制了蛻膜?

圖4各組基質(zhì)細胞感染不同ＲOP16Ⅰ/Ⅲ慢病毒的凋亡率A:ＲOP16Ⅰ/Ⅲ慢病毒轉(zhuǎn)染組;B:陰性對照病毒組;C:對照組;D:各組凋亡率;與空載組比較:＊＊P＜0.01;與對照組比較:##P＜0.01圖5Westernblot法檢測Bax和Bcl-2表達與空載組比較:*P＜0.05;與對照組比較:#P＜0.05劇烈的增殖和分化，這種變化會逐漸延伸到整個子宮內(nèi)膜。這些變化統(tǒng)稱為子宮蛻膜化。子宮內(nèi)膜進行蛻膜化的過程中，首先與子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞的正常增殖密切相關(guān)［7］。當(dāng)胚泡附著在子宮內(nèi)膜上皮時，在附著位置周圍的內(nèi)膜上皮細胞會發(fā)生凋亡，而鄰近的基質(zhì)細胞則會進行廣泛的增殖，增殖的基質(zhì)細胞獲得多倍性而分化成特殊的細胞類型，此時基質(zhì)細胞會向著床位點周圍擴展，逐步形成成熟的蛻膜細胞，然后隨著胚泡的植入，又會按照相同的趨勢持續(xù)退化和凋亡［8］，并被周圍的滋養(yǎng)層或巨噬細胞吞噬［9］。因為有了蛻膜化過程中細胞有序的增殖和退化，使胚泡周圍的蛻膜細胞的數(shù)量得以控制，所以控制了滋養(yǎng)細胞的侵襲。在此過程中，小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞經(jīng)歷了形態(tài)學(xué)和分子水平的獨特變化［10］。蛻膜化過程中，著床位點的蛻膜細胞停止增殖，終末分化后形成的區(qū)域稱之為初級蛻膜區(qū)，第2次分化形成的區(qū)域稱之為次級蛻膜區(qū)，最后次級蛻膜區(qū)的細胞也會發(fā)生凋亡，使著床位點的腔隙增大以便容納生長的胚胎［11］。在本實驗中，在孕鼠胚胎著床的時間段成功分離培養(yǎng)了子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞，在體外培養(yǎng)的小鼠子宮基質(zhì)細胞中過表達ＲOP16Ⅰ/Ⅲ蛋白，并體外誘導(dǎo)蛻膜化時，結(jié)果顯示ＲOP16Ⅰ/Ⅲ蛋白上調(diào)了蛻膜細胞Bcl-2的表達并降低了Bax表達，抑制了蛻膜?


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