目的探討弓形蟲(chóng)ROP16_Ⅰ/Ⅲ蛋白對(duì)妊娠小鼠子宮基質(zhì)細(xì)胞蛻膜化的影響。方法原代培養(yǎng)小鼠子宮基質(zhì)細(xì)胞,用雌二醇、孕酮和cAMP體外誘導(dǎo)蛻膜化的同時(shí)加入ROP16重組慢病毒,72 h后qRT-PCR檢測(cè)蛻膜化標(biāo)志物催乳素（PRL）mRNA的表達(dá),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)蛻膜細(xì)胞凋亡率的變化,并用Western blot檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)水平。結(jié)果提取的小鼠子宮基質(zhì)細(xì)胞純度為95%以上,在體外誘導(dǎo)蛻膜化后,PRL mRNA的表達(dá)隨時(shí)間延長(zhǎng)而顯著升高（P<0.05）,在誘導(dǎo)的蛻膜細(xì)胞中過(guò)表達(dá)ROP16_Ⅰ/Ⅲ,相比于對(duì)照組,蛻膜細(xì)胞的凋亡率降低（P<0.01）,凋亡蛋白Bax表達(dá)降低,Bcl-2蛋白表達(dá)上調(diào)。結(jié)論弓形蟲(chóng)ROP16_Ⅰ/Ⅲ蛋白會(huì)抑制蛻膜細(xì)胞的凋亡,可能會(huì)影響蛻膜細(xì)胞增殖與凋亡的平衡,從而影響胚胎的植入。 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2019年10期 北大核心

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【部分圖文】：

小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的鑒定×200A:熒光顯微鏡下觀察間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Vimentin蛋白;B:熒光顯微鏡下觀察DAPI染色的細(xì)胞核;C:合并觀察計(jì)數(shù)波形蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與

圖4各組基質(zhì)細(xì)胞感染不同ＲOP16Ⅰ/Ⅲ慢病毒的凋亡率A:ＲOP16Ⅰ/Ⅲ慢病毒轉(zhuǎn)染組;B:陰性對(duì)照病毒組;C:對(duì)照組;D:各組凋亡率;與空載組比較:＊＊P＜0.01;與對(duì)照組比較:##P＜0.01圖5Westernblot法檢測(cè)Bax和Bcl-2表達(dá)與空載組比較:*P＜0.05;與對(duì)照組比較:#P＜0.05劇烈的增殖和分化，這種變化會(huì)逐漸延伸到整個(gè)子宮內(nèi)膜。這些變化統(tǒng)稱為子宮蛻膜化。子宮內(nèi)膜進(jìn)行蛻膜化的過(guò)程中，首先與子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的正常增殖密切相關(guān)［7］。當(dāng)胚泡附著在子宮內(nèi)膜上皮時(shí)，在附著位置周圍的內(nèi)膜上皮細(xì)胞會(huì)發(fā)生凋亡，而鄰近的基質(zhì)細(xì)胞則會(huì)進(jìn)行廣泛的增殖，增殖的基質(zhì)細(xì)胞獲得多倍性而分化成特殊的細(xì)胞類型，此時(shí)基質(zhì)細(xì)胞會(huì)向著床位點(diǎn)周圍擴(kuò)展，逐步形成成熟的蛻膜細(xì)胞，然后隨著胚泡的植入，又會(huì)按照相同的趨勢(shì)持續(xù)退化和凋亡［8］，并被周圍的滋養(yǎng)層或巨噬細(xì)胞吞噬［9］。因?yàn)橛辛送懩せ^(guò)程中細(xì)胞有序的增殖和退化，使胚泡周圍的蛻膜細(xì)胞的數(shù)量得以控制，所以控制了滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲。在此過(guò)程中，小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞經(jīng)歷了形態(tài)學(xué)和分子水平的獨(dú)特變化［10］。蛻膜化過(guò)程中，著床位點(diǎn)的蛻膜細(xì)胞停止增殖，終末分化后形成的區(qū)域稱之為初級(jí)蛻膜區(qū)，第2次分化形成的區(qū)域稱之為次級(jí)蛻膜區(qū)，最后次級(jí)蛻膜區(qū)的細(xì)胞也會(huì)發(fā)生凋亡，使著床位點(diǎn)的腔隙增大以便容納生長(zhǎng)的胚胎［11］。在本實(shí)驗(yàn)中，在孕鼠胚胎著床的時(shí)間段成功分離培養(yǎng)了子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞，在體外培養(yǎng)的小鼠子宮基質(zhì)細(xì)胞中過(guò)表達(dá)ＲOP16Ⅰ/Ⅲ蛋白，并體外誘導(dǎo)蛻膜化時(shí)，結(jié)果顯示ＲOP16Ⅰ/Ⅲ蛋白上調(diào)了蛻膜細(xì)胞Bcl-2的表達(dá)并降低了Bax表達(dá)，抑制了蛻膜?

圖4各組基質(zhì)細(xì)胞感染不同ＲOP16Ⅰ/Ⅲ慢病毒的凋亡率A:ＲOP16Ⅰ/Ⅲ慢病毒轉(zhuǎn)染組;B:陰性對(duì)照病毒組;C:對(duì)照組;D:各組凋亡率;與空載組比較:＊＊P＜0.01;與對(duì)照組比較:##P＜0.01圖5Westernblot法檢測(cè)Bax和Bcl-2表達(dá)與空載組比較:*P＜0.05;與對(duì)照組比較:#P＜0.05劇烈的增殖和分化，這種變化會(huì)逐漸延伸到整個(gè)子宮內(nèi)膜。這些變化統(tǒng)稱為子宮蛻膜化。子宮內(nèi)膜進(jìn)行蛻膜化的過(guò)程中，首先與子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的正常增殖密切相關(guān)［7］。當(dāng)胚泡附著在子宮內(nèi)膜上皮時(shí)，在附著位置周圍的內(nèi)膜上皮細(xì)胞會(huì)發(fā)生凋亡，而鄰近的基質(zhì)細(xì)胞則會(huì)進(jìn)行廣泛的增殖，增殖的基質(zhì)細(xì)胞獲得多倍性而分化成特殊的細(xì)胞類型，此時(shí)基質(zhì)細(xì)胞會(huì)向著床位點(diǎn)周圍擴(kuò)展，逐步形成成熟的蛻膜細(xì)胞，然后隨著胚泡的植入，又會(huì)按照相同的趨勢(shì)持續(xù)退化和凋亡［8］，并被周圍的滋養(yǎng)層或巨噬細(xì)胞吞噬［9］。因?yàn)橛辛送懩せ^(guò)程中細(xì)胞有序的增殖和退化，使胚泡周圍的蛻膜細(xì)胞的數(shù)量得以控制，所以控制了滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲。在此過(guò)程中，小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞經(jīng)歷了形態(tài)學(xué)和分子水平的獨(dú)特變化［10］。蛻膜化過(guò)程中，著床位點(diǎn)的蛻膜細(xì)胞停止增殖，終末分化后形成的區(qū)域稱之為初級(jí)蛻膜區(qū)，第2次分化形成的區(qū)域稱之為次級(jí)蛻膜區(qū)，最后次級(jí)蛻膜區(qū)的細(xì)胞也會(huì)發(fā)生凋亡，使著床位點(diǎn)的腔隙增大以便容納生長(zhǎng)的胚胎［11］。在本實(shí)驗(yàn)中，在孕鼠胚胎著床的時(shí)間段成功分離培養(yǎng)了子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞，在體外培養(yǎng)的小鼠子宮基質(zhì)細(xì)胞中過(guò)表達(dá)ＲOP16Ⅰ/Ⅲ蛋白，并體外誘導(dǎo)蛻膜化時(shí)，結(jié)果顯示ＲOP16Ⅰ/Ⅲ蛋白上調(diào)了蛻膜細(xì)胞Bcl-2的表達(dá)并降低了Bax表達(dá)，抑制了蛻膜?


本文編號(hào)：2914038