氧化應(yīng)激是誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞（induced pluripotent stem cell, iPSC）在培養(yǎng)和應(yīng)用中遇到的一個關(guān)鍵問題,探討其作用機(jī)制具有重要的理論和實(shí)踐意義。目前有關(guān)iPSC氧化應(yīng)激的研究相對較少,Nrf2/HO-1信號通路在其中的作用尚不明了。因此,本研究以不同濃度的H₂O₂（100、200、300、400μmol/L）處理人iPSC（hiPSC）,分別在4 h和24 h于倒置顯微鏡下觀察hiPSC及其飼養(yǎng)層細(xì)胞SNL氧化損傷的程度,通過堿性磷酸酶（alkaline phosphatase, AP）試劑盒和超氧化物陰離子熒光探針,分別檢測hiPSC多能性和細(xì)胞活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平,并通過qRT-PCR檢測H₂O₂處理4 h后早期應(yīng)激狀態(tài)下Nrf2和HO-1 mRNA的表達(dá)水平,免疫細(xì)胞化學(xué)和Western印跡檢測p-Nrf2和HO-1蛋白質(zhì)的表達(dá)量。結(jié)果表明:hiPSC和SNL細(xì)胞的ROS水平呈H₂O_... 

【文章來源】：中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2019年07期 第794-802頁 北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 hiPSC培養(yǎng)和H2O2處理
    1.3 堿性磷酸酶活性檢測
    1.4 ROS水平檢測
    1.5 qRT-PCR檢測Nrf2和HO-1 mRNA表達(dá)量
    1.6 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測p-Nrf2和HO-1蛋白質(zhì)的表達(dá)
    1.7 Western印跡檢測p-Nrf2和HO-1蛋白質(zhì)表達(dá)水平
    1.8 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 H2O2處理導(dǎo)致hiPSC和SNL細(xì)胞損傷和死亡
    2.2 H2O2處理導(dǎo)致hiPSC多能性降低
    2.3 H2O2處理增加了hiPSC和SNL細(xì)胞的ROS水平
    2.4 H2O2 處理增強(qiáng)了hiPSC和SNL細(xì)胞中Nrf2/HO-1 mRNA的表達(dá)
    2.5 H2O2處理后hiPSC中p-Nrf2/HO-1蛋白質(zhì)的表達(dá)增加
    2.6 H2O2處理后hiPSC中p-Nrf2/HO-1的蛋白質(zhì)表達(dá)水平升高
3 討論



本文編號：2902751