為了探討復制缺陷型重組腺病毒作為發(fā)展病毒基因工程疫苗，尤其是口服病毒疫苗的有效性和可能性，本文以甲型肝炎病毒結構基因vp3+vp1作為目的基因，人腺病毒5型做載體，研究了重組腺病毒在體外的生物學及免疫學性質，比較了不同途徑接種實驗動物后的免疫學效應。通過RT-PCR方法，從經傳代減毒的甲型肝炎病毒呂-8株P25毒種的RNA中分離了其結構蛋白基因（vp3+vp1），克隆到真核表達質粒pCMV₂ΔBamH Ⅰ的人巨細胞病毒立即早期啟動子之下，將目的表達盒CMV-HAV-polyA插入腺病毒穿梭質粒pXCX₂Not Ⅰ。利用磷酸鈣-DNA共沉淀技術，將線性化穿梭質粒pXCX₂-CMV-HAV與E1區(qū)缺失的復制缺陷型腺病毒載體質粒pJM17共轉染293細胞，通過胞內同源重組，產生復制缺陷型重組腺病毒rAdHAV。rAdHAV可引起典型的細胞病理效應（CPE），PCR及RT-PCR方法證明外源目的基因已插入腺病毒載體。rAdHAV感染非許可性細胞（MA104）后可檢測到特異性熒光灶，蛋白印跡表明為特異性表達產物，在電子顯微鏡下觀察... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數】：118 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

rAd感染293細胞的形態(tài)學變化圖

PCR鑒定d

PCR反應鑒定3伙d


本文編號：2902310