為了探討復(fù)制缺陷型重組腺病毒作為發(fā)展病毒基因工程疫苗，尤其是口服病毒疫苗的有效性和可能性，本文以甲型肝炎病毒結(jié)構(gòu)基因vp3+vp1作為目的基因，人腺病毒5型做載體，研究了重組腺病毒在體外的生物學(xué)及免疫學(xué)性質(zhì)，比較了不同途徑接種實驗動物后的免疫學(xué)效應(yīng)。通過RT-PCR方法，從經(jīng)傳代減毒的甲型肝炎病毒呂-8株P(guān)25毒種的RNA中分離了其結(jié)構(gòu)蛋白基因（vp3+vp1），克隆到真核表達(dá)質(zhì)粒pCMV₂ΔBamH Ⅰ的人巨細(xì)胞病毒立即早期啟動子之下，將目的表達(dá)盒CMV-HAV-polyA插入腺病毒穿梭質(zhì)粒pXCX₂Not Ⅰ。利用磷酸鈣-DNA共沉淀技術(shù)，將線性化穿梭質(zhì)粒pXCX₂-CMV-HAV與E1區(qū)缺失的復(fù)制缺陷型腺病毒載體質(zhì)粒pJM17共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，通過胞內(nèi)同源重組，產(chǎn)生復(fù)制缺陷型重組腺病毒rAdHAV。rAdHAV可引起典型的細(xì)胞病理效應(yīng)（CPE），PCR及RT-PCR方法證明外源目的基因已插入腺病毒載體。rAdHAV感染非許可性細(xì)胞（MA104）后可檢測到特異性熒光灶，蛋白印跡表明為特異性表達(dá)產(chǎn)物，在電子顯微鏡下觀察... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：118 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

rAd感染293細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化圖

PCR鑒定d

PCR反應(yīng)鑒定3伙d


本文編號：2902310