目的HSP100/ClpATPase是一類高度保守而且廣泛存在的熱休克蛋白（heat shockprotein, HSP），屬于AAA+（ATPase associated with diverse cellular activities）蛋白超家族，具有多種生物學(xué)功能。他們可以與蛋白酶ClpP結(jié)合形成ATP依賴的蛋白酶復(fù)合體促進(jìn)特異的底物蛋白質(zhì)的水解，而ClpATPase決定了ClpP的裂解功能和降解底物的特異性[3]。大量研究已證實(shí)ClpATPase在許多病原菌的致病過程中發(fā)揮了重要作用。在金黃色葡萄球菌，ClpX缺陷株的毒力顯著降低，這種作用主要是通過調(diào)節(jié)主要毒力因子的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的[8]。在單核細(xì)胞增多性李斯特菌，ClpC通過調(diào)節(jié)侵襲相關(guān)毒力因子的表達(dá)參與細(xì)菌粘附侵襲宿主細(xì)胞的過程[10]。我們課題組前期對肺炎鏈球菌ClpE的研究發(fā)現(xiàn)：在小鼠腹腔感染模型clpE缺陷肺炎鏈球菌的致病能力明顯降低。那么ClpE影響細(xì)菌致病的機(jī)制如何呢？即它是通過對哪些毒力因子的影響作用而調(diào)控細(xì)菌相應(yīng)的毒力表現(xiàn)呢？要想弄清這些問題，就必須尋找到與ClpE有相互作用的特異性蛋白底物。本研究擬通過目前應(yīng)用... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

ClpEPCR擴(kuò)增產(chǎn)物

圖 1 ClpE PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物。泳道 1：ClpE 基因片段Fig.1 PCR products for clpE Lane 1：ClpE products M：DNA Marker圖 2 重組表達(dá)載體的雙酶pET28a-ClpE，泳道 2：Fig.2 Identification of the Lane 1: pET28a-ClpE digested by EcoRI/SalI M2.2 rClpE 的大腸桿菌表達(dá)與純化與未誘導(dǎo)菌相比，含重組質(zhì)粒 pET28a-ClpE 的 BL21 菌增粗的蛋白條帶，位置在 80kDa 左右，與預(yù)期相符（圖 3的形式存在。采用鎳柱親和層析純化后，SDS-PAGE 顯示（圖 4），純度在 85%左右，超濾除咪唑后可用于多克隆抗

圖 1 ClpE PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物。泳道 1：ClpE 基因片段Fig.1 PCR products for clpE Lane 1：ClpE products M：DNA Marker圖 2 重pET28Fig.2 ILane digeste2.2 rClpE 的大腸桿菌表達(dá)與純化與未誘導(dǎo)菌相比，含重組質(zhì)粒 pET28增粗的蛋白條帶，位置在 80kDa 左右，的形式存在。采用鎳柱親和層析純化后，（圖 4），純度在 85%左右，超濾除咪唑

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]應(yīng)用限制性顯示PCR技術(shù)構(gòu)建細(xì)菌poly(A)化mRNA的cDNA文庫[J]. 胡子有,馬文麗,宋艷斌,張寶,鄭文嶺.  生物技術(shù)通訊. 2002(04)



本文編號：2897682