干細(xì)胞能定向誘導(dǎo)分化為機(jī)體幾乎所有組織中具有特定功能的終末細(xì)胞，進(jìn)而修復(fù)或替代因外傷或疾病而喪失功能的組織或細(xì)胞是該領(lǐng)域研究的重大突破，但其準(zhǔn)確的調(diào)控機(jī)制遠(yuǎn)未解決。本實(shí)驗(yàn)擬以人毛囊源性間充質(zhì)干細(xì)胞（hHF-MSCs）為起始細(xì)胞，在將其誘導(dǎo)分化為平滑肌細(xì)胞（SMCs）的研究中，聚焦于miRNA在這一分化過程中所起的作用，并試圖在miRNA的靶基因上尋找突破。材料取自引產(chǎn)胎兒的頭皮，分離出hHF-MSCs，在對(duì)其干性及多向分化潛能做出鑒定之后，以5ng/ul TGF-β1誘導(dǎo)hHF-MSCs分化為SMCs，用免疫熒光、流式細(xì)胞術(shù)、Western blot、RT-PCR及qRT-PCR檢測誘導(dǎo)后的SMCs特異性標(biāo)記物表達(dá)；通過免疫熒光、qRT-PCR檢測TGF-β1誘導(dǎo)miR-18b作用之后的hHF-MSCs向SMC分化特異性標(biāo)記物的表達(dá)；通過雙熒光素酶報(bào)告基因檢測系統(tǒng)證實(shí)miR-18b在這一過程中的靶點(diǎn)。結(jié)果顯示：1.多潛能性hHF-MSCs在TGF-β1誘導(dǎo)下分化為SMCs，mRNA和蛋白水平上表達(dá)α-SMA、calponin；2.在TGF-β1誘導(dǎo)hHF-MSCs向SMCs分化過程中，... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

胚胎干細(xì)胞分化和發(fā)育示意圖

圖 2 人成體干細(xì)胞群來源部位[19]囊干細(xì)胞毛囊（hair follicle，HF）是皮膚的重要的附屬器之一[25]，具有三個(gè)特征明時(shí)期，生長期(anagen) 、退行期（catagen）和靜止期（telogen）。早在 19，Chase[26]就提出 HF 上部的外毛根鞘囊存在的細(xì)胞群不僅能再生 HF 而且還成皮脂腺和毛囊間表皮。毛囊內(nèi)有幾種類型的干細(xì)胞包括表皮干細(xì)胞、間充干細(xì)胞[27]、黑素細(xì)胞干細(xì)胞[28]以及 nestin 陽性干細(xì)胞[29-30]，這些細(xì)胞群在毛的分布不同但彼此之間有重疊[19]。毛囊干細(xì)胞具有未分化性、自我更新和體殖能力強(qiáng)和慢周期性等成體干細(xì)胞的共性。囊間充質(zhì)干細(xì)胞Jahoda[31]第一次證明 HF-MSCs 位于皮質(zhì)單位（結(jié)締組織鞘和真皮乳頭）處理上，HFMSCs 在傷口愈合過程中對(duì)表皮的修復(fù)可能起作用，這類似于表皮中毛囊表皮干細(xì)胞的作用。Hoogduijn 等[19]體外比較了小鼠 BM-MSCs 和

圖 3. miRNA 生成和功能[92-93]mRNA 在 RNAPol II 作用下轉(zhuǎn)錄為 pri-miRNA，通過 Drosha 切割形成 pre-miRNA，被運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞漿進(jìn)一步被 Dicer 切割形成成熟的 miRNA，再與 mRISC 結(jié)合，導(dǎo)致 mRNA 降解或抑制蛋白翻譯。microRNAs (miRNAs)在干細(xì)胞中的特異性表達(dá)、功能的研究，揭示了miRNAs 已經(jīng)成為基因表達(dá)的關(guān)鍵性調(diào)節(jié)因子，調(diào)控所有的生物學(xué)過程，包括ESCs、iPSCs 和成體組織干細(xì)胞的自我更新和種系特化，以及疾病如癌癥[96-100]。在各種類型的干細(xì)胞中 miRNA 的不同表達(dá)模式和他們的調(diào)節(jié)作用對(duì)于臨床診斷和治療具有潛在性的作用[101]。3.3 miRNAs 和 ESCsESCs的兩個(gè)重要特性——多潛能性和自我更新的維持受到一系列復(fù)雜的分子通路的嚴(yán)格調(diào)控，這包括染色質(zhì)調(diào)節(jié)物、轉(zhuǎn)錄因子和ncRNAs如miRNAs[102]。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Different roles of TGF-β in the multi-lineage differentiation of stem cells[J]. Ming-Ke Wang,Fan Jiang,Zhong-Min Zou,Department of Chemical Defense and Toxicology,College of Preventive Medicine,Third Military Medical University,Chongqing 400038,China Ming-Ke Wang,Health Department of Unit 92371 of People’s Liberation Army,Fuding 355205,Fujian Province,China Ming-Ke Wang,Naval Medical Research Institute,Shanghai 200433,China Hui-Qin Sun,Yong-Ping Su,Institute of Combined Injury,State Key Laboratory of Trauma,Burns and Combined Injury,College of Preventive Medicine,Third Military Medical University,Chongqing 400038,China Ying-Chun Xiang,Department of nephrology,Xinqiao Hospital,Chongqing 400037,China.  World Journal of Stem Cells. 2012(05)
[2]胚胎干細(xì)胞來源的擬胚體分化早期血管平滑肌標(biāo)志物的表達(dá)時(shí)相[J]. 韓雅玲,肖艷平,齊巖梅,康建,閆承慧.  中國應(yīng)用生理學(xué)雜志. 2008(04)



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