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人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的擴(kuò)增與鑒定

發(fā)布時(shí)間:2020-11-16 05:35
   背景:作為組織工程的種子細(xì)胞,胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞因具有多向分化、低免疫原性、免疫調(diào)節(jié)等作用,被廣泛用于臨床疾病的治療及臨床科研中。目的:根據(jù)間充質(zhì)干細(xì)胞的定義來(lái)鑒定從寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院干細(xì)胞研究所獲得的人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞,為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)提供可靠的保障。方法:培養(yǎng)從寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院干細(xì)胞研究所獲得的人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞,觀察其在塑料培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的貼壁情況,并間斷觀察細(xì)胞形態(tài)發(fā)生的變化。將培養(yǎng)的第3代人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面特異性抗原,并且用成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基分別誘導(dǎo)21 d后,采用油紅O、茜素紅、甲苯胺藍(lán)進(jìn)行細(xì)胞染色觀察人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞向脂肪、骨,軟骨細(xì)胞的分化能力。實(shí)驗(yàn)方案得到寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院醫(yī)學(xué)科研倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn)(編號(hào):2018-047)。結(jié)果與結(jié)論:(1)經(jīng)過(guò)體外培養(yǎng)的第3代人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞呈漩渦狀貼壁生長(zhǎng),單個(gè)細(xì)胞呈梭狀,形似纖維細(xì)胞;(2)人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞具有特殊的細(xì)胞免疫學(xué)表型:流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD105、CD90、CD73呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá);造血標(biāo)記物CD34、CD45、CD14以及HLA-DR呈陰性表達(dá);(3)人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞在成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)21 d后,油紅O染色、茜素紅染色及甲苯胺藍(lán)染色均呈陽(yáng)性。提示:根據(jù)間充質(zhì)干細(xì)胞的定義,來(lái)自寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院干細(xì)胞研究所的人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞符合間充質(zhì)干細(xì)胞的特性,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供良好保證。
【部分圖文】:

間充質(zhì)干細(xì)胞,人胎盤,軟骨細(xì)胞,甲苯胺藍(lán)染色


軟骨誘導(dǎo)分化第14天,局部細(xì)胞已聚集成簇,如箭頭所指;C為誘導(dǎo)分化第21天,箭頭所指聚集成簇的細(xì)胞團(tuán)逐漸變?yōu)榍蛐危籇為陰性對(duì)照組,人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞仍呈梭狀貼壁生長(zhǎng)。標(biāo)尺:50μm。圖7人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化(倒置顯微鏡,×200)Figure7Chondrogenicdifferentiationofhumanplacentalmesenchymalstemcells(invertedmicroscope,×200)圖注:圖A為誘導(dǎo)分化21d后成軟骨細(xì)胞被甲苯胺藍(lán)染成藍(lán)色;圖B箭頭所指為聚集呈球狀的軟骨細(xì)胞被染成深藍(lán)色。標(biāo)尺:100μm。圖8人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)21d甲苯胺藍(lán)染色鑒定(倒置顯微鏡,×100)Figure8Toluidinebluestainingofhumanplacentalmesenchymalstemcellsafter21daysofchondrogenicdifferentiation(invertedmicroscope,×100)
【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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