近年來組織工程(tissue engineering, TE)技術(shù)迅速發(fā)展并越來越多的應(yīng)用于臨床。其中,組織工程皮膚取得了很大的進(jìn)步并在臨床治療中表現(xiàn)出了良好的效果。毛囊(hair follicle, HF)作為皮膚附屬器官,具有保護(hù)皮膚、調(diào)節(jié)體溫、知覺等重要的生物學(xué)功能,也成為組織工程學(xué)的研究熱點(diǎn)。毛囊的發(fā)育發(fā)生是上皮-間充質(zhì)(EMIs, epithelial-mesenchymal-interactions)相互作用的結(jié)果,隆突部細(xì)胞(bulge cells, BCs)作為其上皮成分,顯現(xiàn)出細(xì)胞周期慢等干細(xì)胞特性,其作為組織工程種子細(xì)胞來源具有很大前景,而毛乳頭組織(dermal papillae, DP)是誘導(dǎo)形成毛發(fā)的主要間充質(zhì)組織,毛乳頭細(xì)胞(dermal papillae cells, DPCs)則具有較強(qiáng)的誘導(dǎo)能力。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)從毛囊中獲取這兩種細(xì)胞并在體外擴(kuò)增,而后以一定方式重組觀察此種方法下形成毛囊的可能性。實(shí)驗(yàn)步驟及結(jié)論如下: 1、毛乳頭細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定 利用機(jī)械法于體式顯微鏡下解剖SD大鼠毛囊觸須后,進(jìn)一步分離出毛乳頭組織,并利用組織塊法進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。獲得的DPCs呈成纖維細(xì)胞樣,經(jīng)過α-SMA、VIM免疫熒光染色,證明其來源于毛囊間充質(zhì),并利用RealTime PCR檢測出DPCs具有ALP高表達(dá)的特性,更增加了其來源于毛乳頭的證據(jù)。 2、隆突部細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定 采用機(jī)械方法分離出大鼠的單個(gè)觸須毛囊,而后采用Dispase酶消化法結(jié)合機(jī)械法顯微分離獲取隆突部組織,利用K-SFM培養(yǎng)液于六孔板中培養(yǎng)獲得表皮樣細(xì)胞。培養(yǎng)出的BCs生長狀態(tài)良好,并具有較強(qiáng)的增殖能力。PCR顯示K15、K19表達(dá)陽性,表明所獲取及培養(yǎng)的BCs來源于隆突部組織。 3、毛乳頭細(xì)胞與隆突部細(xì)胞的組合及其毛囊形成能力 以一定比例混合DPCs于預(yù)先調(diào)好的膠原中,同時(shí)制作BCs細(xì)胞團(tuán),使BCs細(xì)胞團(tuán)包埋于膠原內(nèi),經(jīng)過體外培養(yǎng)24小時(shí)后,體內(nèi)移植于SD大鼠腎被膜下。分別于兩周、三周后取材,對取材細(xì)胞團(tuán)的HE及免疫熒光切片結(jié)果發(fā)現(xiàn),移植物內(nèi)有毛囊樣的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生。證明,利用DPCs和BCs以此復(fù)合細(xì)胞團(tuán)的方法混合具有形成毛囊的潛能。 4、Wnt3a對真皮鞘細(xì)胞的作用 本試驗(yàn)從大鼠的毛囊中獲得了DSCs,并比較了Wnt3a刺激前后DSCs表達(dá)ALP及CD34的變化,從PCR結(jié)果中可以得出ALP并沒有明顯的變化,而CD34的表達(dá)量明顯增高。說明Wnt經(jīng)典通路的激活劑Wnt3a對體外DSCs毛發(fā)誘導(dǎo)能力的提高也許沒有作用,猜想Wnt3a可能與影響DSCs細(xì)胞腫瘤發(fā)生有關(guān)。 本實(shí)驗(yàn)從大鼠觸須部毛囊中成功分離了并獲得了分別來源于表皮成分和間充質(zhì)成分的兩種細(xì)胞,并利用這兩種細(xì)胞以特定的方式于體內(nèi)異位構(gòu)建出了毛囊樣的結(jié)構(gòu)。移植的復(fù)合細(xì)胞團(tuán)在短時(shí)間內(nèi)可見毛囊結(jié)構(gòu)產(chǎn)生,為組織工程皮膚中重建毛囊鋪下了基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R329
【部分圖文】：

機(jī)械法分離出的單個(gè)毛囊

機(jī)械法從毛囊中分離出毛乳頭

機(jī)械法分離出的毛乳頭
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號：2885557