目的探究TAC-NFAT軸調(diào)控GRβ在拮抗糖皮質(zhì)激素快速減敏中的作用機(jī)制。方法 1%DNCB重復(fù)刺激Balb/c小鼠背部皮膚構(gòu)建慢性接觸性皮炎動(dòng)物模型,以未經(jīng)處理的模型小鼠為對(duì)照組,并分別用DEX、TAC、DEX+TAC處理該動(dòng)物模型。通過(guò)HE染色、炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)、qRT-PCR檢測(cè)TNF-α的表達(dá)水平反映不同處理組皮炎的變化情況,同時(shí)采用q RT-PCR和Western blot檢測(cè)糖皮質(zhì)激素受體β(GRβ)的mRNA和蛋白表達(dá)。TAC作用角質(zhì)細(xì)胞NTCC2544后,Western blot檢測(cè)NFAT1和NFAT2的表達(dá)水平。構(gòu)建含GRβ啟動(dòng)子序列的熒光素酶報(bào)告載體pGL3-basic-GRβ,雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證NFAT作用于GRβ啟動(dòng)子區(qū)域。結(jié)果與對(duì)照組相比,DEX能夠顯著降低DNCB誘導(dǎo)的小鼠慢性接觸性皮炎的炎性反應(yīng)。與DEX處理組、TAC處理組相比,DEX+TAC處理組炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)與TNF-α表達(dá)均顯著降低(P0.05),GRβ的mRNA和蛋白水平表達(dá)顯著降低(P0.05)。體外實(shí)驗(yàn)顯示TAC能夠抑制人角質(zhì)細(xì)胞NCTC2554 GRβ的表達(dá),并呈劑量依賴性,同時(shí)TAC也能夠抑制NFAT1和NFAT2的表達(dá)。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)NFAT1和NFAT2能夠作用于GRβ的啟動(dòng)子序列區(qū)域。結(jié)論 TAC通過(guò)TAC-NFAT軸調(diào)控GRβ的表達(dá)而拮抗糖皮質(zhì)激素快速減敏。該發(fā)現(xiàn)為臨床工作中TAC與GC類藥物的合理使用提供了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試劑與動(dòng)物
    1.2 動(dòng)物模型的建立
    1.3 病理組織切片染色（HE）
    1.4 皮膚組織RNA提取
    1.5 定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）
    1.6 TAC作用NCTC2544人角質(zhì)細(xì)胞
    1.7 雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證NFAT增強(qiáng)GRβ啟動(dòng)子的活性
    1.8 Western blotting
    1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 HE染色及TNF-α檢測(cè)評(píng)價(jià)DEX、TAC和DEX+TAC的抗炎作用
    2.2 qRT-PCR和Western blot檢測(cè)GRβmRNA和蛋白表達(dá)
    2.3 TAC抑制人角質(zhì)細(xì)胞NCTC2544 GRβ的表達(dá)
    2.4 NFAT1、NFAT2調(diào)控GRβ轉(zhuǎn)錄表達(dá)
3 討論

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