人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)與人單純皰疹病毒1型(herpes simplex virus1, HSV-1)以及EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)同屬皰疹病毒科,是導(dǎo)致新生兒發(fā)育異常、感覺(jué)神經(jīng)性耳聾、智力低下的首要病毒性病因,是一類(lèi)重要的普遍性感染的人類(lèi)醫(yī)學(xué)病毒。HCMV基因組的復(fù)制發(fā)生在細(xì)胞核中,被認(rèn)為是病毒進(jìn)入裂解循環(huán)的中心環(huán)節(jié),同時(shí)也是是一個(gè)高度復(fù)雜和調(diào)控的過(guò)程,涉及到復(fù)制相關(guān)蛋白內(nèi)部,與復(fù)制起始位點(diǎn)之間,以及同宿主細(xì)胞因子的相互作用。本研究在實(shí)驗(yàn)室前期通過(guò)高通量酵母雙雜交技術(shù)篩選HCMV復(fù)制蛋白與宿主細(xì)胞因子相互作用的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)上,通過(guò)酵母雙雜交和蛋白質(zhì)免疫共沉淀以及細(xì)胞激光共聚焦進(jìn)一步證實(shí)了HCMV引物酶相關(guān)因子UL102與宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)錄共抑制子CtBP2以及解旋酶UL105與Snapin這兩對(duì)相互作用,并首次進(jìn)行了深入的生物學(xué)意義的研究。 先前報(bào)道HCMV引物酶相關(guān)因子UL102的主要功能是參與并調(diào)節(jié)解旋酶-引物酶復(fù)合體(UL105,UL70和UL102)的活性。通過(guò)特異性針對(duì)CtBP2的小RNA干擾的下調(diào)和過(guò)表達(dá)CtBP2以及改進(jìn)的HCMV復(fù)制子系統(tǒng),本研究揭示了一個(gè)全新的對(duì)抗HCMV感染的細(xì)胞限定因子CtBP2,作為轉(zhuǎn)錄共抑制子不僅可以抑制病毒立即早期啟動(dòng)子(major immediate-early promoter, MIEP)的表達(dá),而且可以通過(guò)與引物酶相關(guān)因子UL102的直接相互作用影響HCMV的復(fù)制。同時(shí),通過(guò)雙熒光報(bào)告系統(tǒng),我們發(fā)現(xiàn)病毒晚期,隨著UL102表達(dá)的積累,UL102也可以通過(guò)與CtBP2的相互作用解除抑制作用,并且調(diào)節(jié)病毒晚期基因的表達(dá)。最后,CtBP2的穩(wěn)定持續(xù)表達(dá)有助于低感染劑量下(Multiplicity of infection, MOI) HCMV病毒在細(xì)胞內(nèi)的持續(xù)性感染。 HCMV解旋酶UL105參與病毒基因組復(fù)制過(guò)程中沿著后隨鏈(lagging strand)持續(xù)的解開(kāi)復(fù)制叉前面的雙鏈Ⅰ)NA。HCMV的DNA合成發(fā)生在細(xì)胞核之中,因此作為復(fù)制的必需蛋白之一,UL105入核是必要的。本研究發(fā)現(xiàn)宿主細(xì)胞因子Snapin(主要定位于細(xì)胞質(zhì)并與囊泡膜蛋白結(jié)合)通過(guò)與HCMV解旋酶UL105的相互作用,限制了UL105作為主要復(fù)制蛋白進(jìn)入細(xì)胞核。通過(guò)特異針對(duì)Snapin的小干擾RNA的下調(diào)和穩(wěn)轉(zhuǎn)過(guò)表達(dá)Snapin可以改變UL105在細(xì)胞核質(zhì)中的分布比例,從而影響HCMV的復(fù)制進(jìn)程和子代病毒的產(chǎn)生。 參與復(fù)制的6個(gè)核心復(fù)制蛋白(UL44、UL54、UL57、UL70、UL102、UL105)同所有的皰疹病毒一樣具有高度的序列和功能保守性,通常作為FDA批準(zhǔn)的抗皰疹病毒治療的主要藥物靶標(biāo)。本論文所研究的兩對(duì)HCMV復(fù)制蛋白與宿主細(xì)胞因子間的相互作用,將有利于更加深入的理解宿主細(xì)胞針對(duì)HCMV基因組復(fù)制的這一核心環(huán)節(jié)而發(fā)展的對(duì)抗HCMV感染的策略以及病毒與細(xì)胞之間的拮抗關(guān)系,為發(fā)展新的抗病毒治療方法提供了參考依據(jù)。
【學(xué)位單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類(lèi)】：R3416
【部分圖文】：

CGpyri^ I99< - 97 Marks l!^dhl?e圖1.1 HCMV病毒顆粒結(jié)構(gòu)示意圖(圖片來(lái)源 http://www. virol ogy. net/big_viroIogy/bvdnaherpes. html)HCMV的核衣殼由五種病毒核心蛋白組成：MCP(major capsid protein, UL86

圖1.2 HCMV基因組結(jié)構(gòu)示意圖（根據(jù)參考文獻(xiàn)[6]修改）HCMV基因組2301cb左右，編碼氨基酸數(shù)大于100 乂少于60%重疊的開(kāi)放閱讀框ORF根據(jù)CCMV保守估計(jì)至少165個(gè)，打文獻(xiàn)推測(cè)最大編碼數(shù)可能超過(guò)200多個(gè)病毒蛋白，其中依然有很多病毒蛋白的功能不甚清楚[20-22丨。目前已知

Strains)和臨床株（Clinical Isolates)。兩種實(shí)驗(yàn)株AD169和Towne克隆之前在成纖維細(xì)胞中進(jìn)行了廣泛的傳代，失去了多個(gè)基因的片段并同時(shí)獲得幾乎相同大小的多基因片段以維持整個(gè)基因組大小不變[26]。AD169分離自扁桃腺肥大的小孩，基因組缺少ORFsUL133-UL151,攜帶ORFs TRL1-14和〖RL1-14重復(fù)序列[20]。Towne株分離自先天性感染HCMV嬰兒的尿液，具有UL1和a，b重復(fù)序列但失去ORFs UL144-UL151 [27]。這兩種實(shí)驗(yàn)株都能合成gH-gL-pUL 128-pUL 130-pUL 131復(fù)合物，增加了細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的選擇壓力，因此更能有效的在成纖維細(xì)胞中增值，通常作為疫苗株候選。另外四種臨床株(Toledo、FIX，、TR和PH)克隆成BACs之前只進(jìn)行了有限代數(shù)的傳代，比較接近臨床病毒。其中，Toledo分離自先天性感染HCMV嬰兒的尿液[28]; FIX(VR18M)分離自原初感染的孕婦[29, 30]； PH分離自骨髓移植病人[31]; TR則分離自突發(fā)視網(wǎng)膜炎的艾滋病人[32]。以上6種代表性HCMV病毒株基因組結(jié)構(gòu)的對(duì)比如圖1.4所示。
【相似文獻(xiàn)】

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1 趙雪云;細(xì)胞器DNA:瘧原蟲(chóng)DNA復(fù)制中的小角色[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(寄生蟲(chóng)病分冊(cè));1997年03期

2 王奇;樊友杰;李賓;;基于DNA折紙的DNA復(fù)制的單分子檢測(cè)和表征[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年09期

3 黃寶國(guó);惠永正;呂幼儀;洪國(guó)藩;;4′-硫代-2′-脫氧胸腺嘧啶核苷-5′-三磷酸化學(xué)合成及對(duì)DNA復(fù)制的影響[J];科學(xué)通報(bào);1993年05期

4 Bodner JW;黃明;;腺病毒DNA復(fù)制動(dòng)力學(xué):Ⅰ.腺病毒DNA復(fù)制速率[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊(cè));1981年03期

5 郭明飛;DNA復(fù)制的調(diào)控與腫瘤細(xì)胞增殖的研究進(jìn)展[J];赤峰學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2005年03期

6 張曉偉,童坦君;真核生物DNA復(fù)制與細(xì)胞周期的關(guān)系[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));1995年06期

7 江明宏;舒茂琴;覃躍龍;;ORC1與大鼠血管平滑肌細(xì)胞DNA復(fù)制的關(guān)系及意義探討[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年06期

8 江明宏;舒茂琴;覃躍龍;王倩;;起始識(shí)別復(fù)合物1基因在血管平滑肌細(xì)胞DNA復(fù)制中的作用[J];中華病理學(xué)雜志;2007年02期

9 陳麗,畢勇毅,陶寧,王紅夏,穎馬強(qiáng);用cDNA微列陣技術(shù)探討苯中毒相關(guān)的DNA復(fù)制及損傷修復(fù)基因表達(dá)譜的改變[J];中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志;2005年04期

10 梁英銳,程繼東;巢式PCR證明肝癌細(xì)胞有HBV─DNA復(fù)制[J];新消化病學(xué)雜志;1996年08期

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2 尚曦瑩;基因轉(zhuǎn)錄、DNA復(fù)制及染色質(zhì)結(jié)構(gòu)在基因定點(diǎn)修復(fù)中的作用及機(jī)制研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2006年

3 蔣培霞;硫磺礦硫化葉菌Orc1/Cdc6蛋白在DNA復(fù)制起始中的調(diào)控功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

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3 王奇;基于DNA折紙的DNA復(fù)制的原子力顯微術(shù)研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（上海應(yīng)用物理研究所）;2014年

4 滕淑靜;巨噬細(xì)胞集落刺激因子與微小染色體維持蛋白7的相互作用及其對(duì)DNA復(fù)制的影響[D];南華大學(xué);2007年

5 周建宏;均勻磁場(chǎng)對(duì)DNA復(fù)制過(guò)程的影響初探及其發(fā)生裝置的設(shè)計(jì)[D];陜西師范大學(xué);2008年

6 謝運(yùn)昌;結(jié)核分枝桿菌的DNA復(fù)制起始因子相互作用的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

7 黃方;HPV16 E6與Daxx相互作用的效果及機(jī)制[D];南華大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2881446