溫度和時間對臨床應(yīng)用間充質(zhì)干細(xì)胞長距離運輸?shù)挠绊?/H1>
發(fā)布時間:2020-11-10 05:40
間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell, MSC)具有多向分化潛能和免疫調(diào)節(jié)能力,而且沒有免疫原性,在臨床上應(yīng)用廣泛,可以用于同種異體治療多種自身免疫性疾病和組織修復(fù)等。但是干細(xì)胞的長距離運輸和保存問題給間充質(zhì)干細(xì)胞的廣泛應(yīng)用帶來了一定的困難。目前,運輸過程中時間和溫度對干細(xì)胞存活率的影響不是十分明確。本實驗以6組第4代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為例,采集細(xì)胞清洗后重懸于密封的生理鹽水瓶中,可以直接用于臨床注射。對注射前的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞表面標(biāo)記和分化潛能鑒定,同時檢測0℃、4℃、冰盒環(huán)境(8℃-17℃)、常溫和37℃等不同的環(huán)境溫度下干細(xì)胞隨著時間的延長存活率的變化。實驗結(jié)果顯示,在設(shè)置溫度為4℃的小型車載冰箱中運輸?shù)母杉?xì)胞狀態(tài)保存最好,在6小時內(nèi)細(xì)胞存活率可以保持在90%以上,在保溫箱中放置冰袋(8℃-17℃)保存的效果次之,在2小時內(nèi)細(xì)胞存活率可以保持在90%以上。因此,推薦在超過2小時并保持在6小時內(nèi)的長距離運輸過程中,用4℃恒溫小型冰箱保持干細(xì)胞的活性。如果運輸時間超過6小時,不建議進(jìn)行遠(yuǎn)距離運輸,應(yīng)該選擇更快捷的交通工具,讓運輸過程保持在6小時內(nèi)。
【部分圖文】:

No.5rollupNo.28Issue,October2019292019年10月第5卷第28期智慧健康SmartHealthcare圖1人骨髓MSCP0代細(xì)胞圖2人骨髓MSCP4代細(xì)胞2.2人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定將6個MSC的第4代細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞表面標(biāo)記抗原流式鑒定,所有細(xì)胞CD73,CD90和CD105陽性表達(dá)達(dá)到95%以上,CD14,CD34,CD45,HLA-DR皆幾乎不表達(dá),表達(dá)率在0-1%,圖3所示為其中一個MSC細(xì)胞表面標(biāo)記抗原的表達(dá)情況。6個細(xì)胞皆可以進(jìn)行成骨、成脂和成軟骨分化,圖4中a,b和c分別顯示成骨、成脂和成軟骨分化陽性的圖示。圖3人骨髓MSC細(xì)胞表面標(biāo)記抗原表達(dá)情況圖4人骨髓MSC成骨、成脂和成軟骨分化鑒定2.3時間溫度對生理鹽水中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的影響將6個4代的人MSC分別分成5份裝入100mL密封生理鹽水袋中,分別放入盛冰水混合物的保溫盒(0℃)、4℃恒溫車載小型冰箱、裝有預(yù)先冷凍冰袋的保溫盒(8-17℃)、常溫保溫盒(25℃左右)和37℃恒溫培養(yǎng)箱(對照)。將上述30份細(xì)胞分別在6個時間點(0h,2h,4h,6h,8h和24h)用無菌1mL注射器抽取少量細(xì)胞進(jìn)行存活率檢測。發(fā)現(xiàn)只有4℃恒溫保存的細(xì)胞保持存活率在90%上的時間最長,可以達(dá)到6小時,其次是放入裝有預(yù)先冷凍冰袋的保溫盒(8-17℃)的細(xì)胞,可以達(dá)到2小時(表1)。繪制成折線圖后發(fā)現(xiàn)4℃恒溫保存的方法細(xì)胞存活率在每個時間點都最高(圖5)。圖5時間和溫度對人骨髓MSC存活率的影響注:a.臺盼藍(lán)染色法檢測人骨髓MSC的細(xì)胞活性,活細(xì)胞染色顯示細(xì)胞膜周圍為藍(lán)色,細(xì)胞內(nèi)部為白色;死細(xì)胞細(xì)胞膜破損,染料進(jìn)入?

tober2019292019年10月第5卷第28期智慧健康SmartHealthcare圖1人骨髓MSCP0代細(xì)胞圖2人骨髓MSCP4代細(xì)胞2.2人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定將6個MSC的第4代細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞表面標(biāo)記抗原流式鑒定,所有細(xì)胞CD73,CD90和CD105陽性表達(dá)達(dá)到95%以上,CD14,CD34,CD45,HLA-DR皆幾乎不表達(dá),表達(dá)率在0-1%,圖3所示為其中一個MSC細(xì)胞表面標(biāo)記抗原的表達(dá)情況。6個細(xì)胞皆可以進(jìn)行成骨、成脂和成軟骨分化,圖4中a,b和c分別顯示成骨、成脂和成軟骨分化陽性的圖示。圖3人骨髓MSC細(xì)胞表面標(biāo)記抗原表達(dá)情況圖4人骨髓MSC成骨、成脂和成軟骨分化鑒定2.3時間溫度對生理鹽水中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的影響將6個4代的人MSC分別分成5份裝入100mL密封生理鹽水袋中,分別放入盛冰水混合物的保溫盒(0℃)、4℃恒溫車載小型冰箱、裝有預(yù)先冷凍冰袋的保溫盒(8-17℃)、常溫保溫盒(25℃左右)和37℃恒溫培養(yǎng)箱(對照)。將上述30份細(xì)胞分別在6個時間點(0h,2h,4h,6h,8h和24h)用無菌1mL注射器抽取少量細(xì)胞進(jìn)行存活率檢測。發(fā)現(xiàn)只有4℃恒溫保存的細(xì)胞保持存活率在90%上的時間最長,可以達(dá)到6小時,其次是放入裝有預(yù)先冷凍冰袋的保溫盒(8-17℃)的細(xì)胞,可以達(dá)到2小時(表1)。繪制成折線圖后發(fā)現(xiàn)4℃恒溫保存的方法細(xì)胞存活率在每個時間點都最高(圖5)。圖5時間和溫度對人骨髓MSC存活率的影響注:a.臺盼藍(lán)染色法檢測人骨髓MSC的細(xì)胞活性,活細(xì)胞染色顯示細(xì)胞膜周圍為藍(lán)色,細(xì)胞內(nèi)部為白色;死細(xì)胞細(xì)胞膜破損,染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,染色顯示整個細(xì)

智慧健康SmartHealthcare圖1人骨髓MSCP0代細(xì)胞圖2人骨髓MSCP4代細(xì)胞2.2人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定將6個MSC的第4代細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞表面標(biāo)記抗原流式鑒定,所有細(xì)胞CD73,CD90和CD105陽性表達(dá)達(dá)到95%以上,CD14,CD34,CD45,HLA-DR皆幾乎不表達(dá),表達(dá)率在0-1%,圖3所示為其中一個MSC細(xì)胞表面標(biāo)記抗原的表達(dá)情況。6個細(xì)胞皆可以進(jìn)行成骨、成脂和成軟骨分化,圖4中a,b和c分別顯示成骨、成脂和成軟骨分化陽性的圖示。圖3人骨髓MSC細(xì)胞表面標(biāo)記抗原表達(dá)情況圖4人骨髓MSC成骨、成脂和成軟骨分化鑒定2.3時間溫度對生理鹽水中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的影響將6個4代的人MSC分別分成5份裝入100mL密封生理鹽水袋中,分別放入盛冰水混合物的保溫盒(0℃)、4℃恒溫車載小型冰箱、裝有預(yù)先冷凍冰袋的保溫盒(8-17℃)、常溫保溫盒(25℃左右)和37℃恒溫培養(yǎng)箱(對照)。將上述30份細(xì)胞分別在6個時間點(0h,2h,4h,6h,8h和24h)用無菌1mL注射器抽取少量細(xì)胞進(jìn)行存活率檢測。發(fā)現(xiàn)只有4℃恒溫保存的細(xì)胞保持存活率在90%上的時間最長,可以達(dá)到6小時,其次是放入裝有預(yù)先冷凍冰袋的保溫盒(8-17℃)的細(xì)胞,可以達(dá)到2小時(表1)。繪制成折線圖后發(fā)現(xiàn)4℃恒溫保存的方法細(xì)胞存活率在每個時間點都最高(圖5)。圖5時間和溫度對人骨髓MSC存活率的影響注:a.臺盼藍(lán)染色法檢測人骨髓MSC的細(xì)胞活性,活細(xì)胞染色顯示細(xì)胞膜周圍為藍(lán)色,細(xì)胞內(nèi)部為白色;死細(xì)胞細(xì)胞膜破損,染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,染色顯示整個細(xì)胞呈藍(lán)色;b.6個人骨髓MSC在5個溫度條?
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No.5rollupNo.28Issue,October2019292019年10月第5卷第28期智慧健康SmartHealthcare圖1人骨髓MSCP0代細(xì)胞圖2人骨髓MSCP4代細(xì)胞2.2人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定將6個MSC的第4代細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞表面標(biāo)記抗原流式鑒定,所有細(xì)胞CD73,CD90和CD105陽性表達(dá)達(dá)到95%以上,CD14,CD34,CD45,HLA-DR皆幾乎不表達(dá),表達(dá)率在0-1%,圖3所示為其中一個MSC細(xì)胞表面標(biāo)記抗原的表達(dá)情況。6個細(xì)胞皆可以進(jìn)行成骨、成脂和成軟骨分化,圖4中a,b和c分別顯示成骨、成脂和成軟骨分化陽性的圖示。圖3人骨髓MSC細(xì)胞表面標(biāo)記抗原表達(dá)情況圖4人骨髓MSC成骨、成脂和成軟骨分化鑒定2.3時間溫度對生理鹽水中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的影響將6個4代的人MSC分別分成5份裝入100mL密封生理鹽水袋中,分別放入盛冰水混合物的保溫盒(0℃)、4℃恒溫車載小型冰箱、裝有預(yù)先冷凍冰袋的保溫盒(8-17℃)、常溫保溫盒(25℃左右)和37℃恒溫培養(yǎng)箱(對照)。將上述30份細(xì)胞分別在6個時間點(0h,2h,4h,6h,8h和24h)用無菌1mL注射器抽取少量細(xì)胞進(jìn)行存活率檢測。發(fā)現(xiàn)只有4℃恒溫保存的細(xì)胞保持存活率在90%上的時間最長,可以達(dá)到6小時,其次是放入裝有預(yù)先冷凍冰袋的保溫盒(8-17℃)的細(xì)胞,可以達(dá)到2小時(表1)。繪制成折線圖后發(fā)現(xiàn)4℃恒溫保存的方法細(xì)胞存活率在每個時間點都最高(圖5)。圖5時間和溫度對人骨髓MSC存活率的影響注:a.臺盼藍(lán)染色法檢測人骨髓MSC的細(xì)胞活性,活細(xì)胞染色顯示細(xì)胞膜周圍為藍(lán)色,細(xì)胞內(nèi)部為白色;死細(xì)胞細(xì)胞膜破損,染料進(jìn)入?
tober2019292019年10月第5卷第28期智慧健康SmartHealthcare圖1人骨髓MSCP0代細(xì)胞圖2人骨髓MSCP4代細(xì)胞2.2人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定將6個MSC的第4代細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞表面標(biāo)記抗原流式鑒定,所有細(xì)胞CD73,CD90和CD105陽性表達(dá)達(dá)到95%以上,CD14,CD34,CD45,HLA-DR皆幾乎不表達(dá),表達(dá)率在0-1%,圖3所示為其中一個MSC細(xì)胞表面標(biāo)記抗原的表達(dá)情況。6個細(xì)胞皆可以進(jìn)行成骨、成脂和成軟骨分化,圖4中a,b和c分別顯示成骨、成脂和成軟骨分化陽性的圖示。圖3人骨髓MSC細(xì)胞表面標(biāo)記抗原表達(dá)情況圖4人骨髓MSC成骨、成脂和成軟骨分化鑒定2.3時間溫度對生理鹽水中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的影響將6個4代的人MSC分別分成5份裝入100mL密封生理鹽水袋中,分別放入盛冰水混合物的保溫盒(0℃)、4℃恒溫車載小型冰箱、裝有預(yù)先冷凍冰袋的保溫盒(8-17℃)、常溫保溫盒(25℃左右)和37℃恒溫培養(yǎng)箱(對照)。將上述30份細(xì)胞分別在6個時間點(0h,2h,4h,6h,8h和24h)用無菌1mL注射器抽取少量細(xì)胞進(jìn)行存活率檢測。發(fā)現(xiàn)只有4℃恒溫保存的細(xì)胞保持存活率在90%上的時間最長,可以達(dá)到6小時,其次是放入裝有預(yù)先冷凍冰袋的保溫盒(8-17℃)的細(xì)胞,可以達(dá)到2小時(表1)。繪制成折線圖后發(fā)現(xiàn)4℃恒溫保存的方法細(xì)胞存活率在每個時間點都最高(圖5)。圖5時間和溫度對人骨髓MSC存活率的影響注:a.臺盼藍(lán)染色法檢測人骨髓MSC的細(xì)胞活性,活細(xì)胞染色顯示細(xì)胞膜周圍為藍(lán)色,細(xì)胞內(nèi)部為白色;死細(xì)胞細(xì)胞膜破損,染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,染色顯示整個細(xì)
智慧健康SmartHealthcare圖1人骨髓MSCP0代細(xì)胞圖2人骨髓MSCP4代細(xì)胞2.2人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定將6個MSC的第4代細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞表面標(biāo)記抗原流式鑒定,所有細(xì)胞CD73,CD90和CD105陽性表達(dá)達(dá)到95%以上,CD14,CD34,CD45,HLA-DR皆幾乎不表達(dá),表達(dá)率在0-1%,圖3所示為其中一個MSC細(xì)胞表面標(biāo)記抗原的表達(dá)情況。6個細(xì)胞皆可以進(jìn)行成骨、成脂和成軟骨分化,圖4中a,b和c分別顯示成骨、成脂和成軟骨分化陽性的圖示。圖3人骨髓MSC細(xì)胞表面標(biāo)記抗原表達(dá)情況圖4人骨髓MSC成骨、成脂和成軟骨分化鑒定2.3時間溫度對生理鹽水中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的影響將6個4代的人MSC分別分成5份裝入100mL密封生理鹽水袋中,分別放入盛冰水混合物的保溫盒(0℃)、4℃恒溫車載小型冰箱、裝有預(yù)先冷凍冰袋的保溫盒(8-17℃)、常溫保溫盒(25℃左右)和37℃恒溫培養(yǎng)箱(對照)。將上述30份細(xì)胞分別在6個時間點(0h,2h,4h,6h,8h和24h)用無菌1mL注射器抽取少量細(xì)胞進(jìn)行存活率檢測。發(fā)現(xiàn)只有4℃恒溫保存的細(xì)胞保持存活率在90%上的時間最長,可以達(dá)到6小時,其次是放入裝有預(yù)先冷凍冰袋的保溫盒(8-17℃)的細(xì)胞,可以達(dá)到2小時(表1)。繪制成折線圖后發(fā)現(xiàn)4℃恒溫保存的方法細(xì)胞存活率在每個時間點都最高(圖5)。圖5時間和溫度對人骨髓MSC存活率的影響注:a.臺盼藍(lán)染色法檢測人骨髓MSC的細(xì)胞活性,活細(xì)胞染色顯示細(xì)胞膜周圍為藍(lán)色,細(xì)胞內(nèi)部為白色;死細(xì)胞細(xì)胞膜破損,染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,染色顯示整個細(xì)胞呈藍(lán)色;b.6個人骨髓MSC在5個溫度條?
【參考文獻(xiàn)】
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