不對(duì)稱細(xì)胞分裂是指1個(gè)細(xì)胞分裂為2個(gè)具有不同發(fā)育潛能的細(xì)胞，是產(chǎn)生細(xì)胞多樣性的基本途徑。Numb蛋白是神經(jīng)發(fā)育中第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)呈不對(duì)稱分布的蛋白，是產(chǎn)生不對(duì)稱細(xì)胞分裂的重要因素之一。我們從人胎腦cDNA文庫(kù)中得到一條與小鼠Numb配體蛋白基因Lnx（Ligand of Numb Protein-X）高度同源的新基因。根據(jù)HUGO命名委員會(huì)同意，我們將其命名為人類Numb配體蛋白基因LNX。 該基因全長(zhǎng)3737 bp，開(kāi)放閱讀框從236位到2134位，其編碼蛋白含有4個(gè)PDZ結(jié)構(gòu)域和1個(gè)與Numb蛋白的PTB結(jié)構(gòu)域作用的LDNPAY基序。Northern雜交、RT-PCR和原位雜交顯示，LNX mRNA在腦中的分布有一定的特異性，而且在膠質(zhì)瘤組織中高表達(dá)。小鼠不同發(fā)育階段的腎臟原位雜交顯示，LNX mRNA 主要表達(dá)在腎臟髓質(zhì)中，且隨著腎臟的發(fā)育表達(dá)量逐漸減少。對(duì)基因芯片表達(dá)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類分析，發(fā)現(xiàn)LNX基因的相關(guān)基因中包括FE65、Frizzled等信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)基因。采用酵母雙雜交系統(tǒng)，我們用LNX蛋白中的PDZ結(jié)構(gòu)域?yàn)檎T餌，篩選相互作用蛋白。我們發(fā)現(xiàn)Ski相互作用蛋白SKIP和PDZ結(jié)合激酶PBK可以和LNX結(jié)合，酵母結(jié)合試驗(yàn)、體外pulldown試驗(yàn)和體內(nèi)免疫共沉淀試驗(yàn)驗(yàn)證了它們的相互作用。用熒光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，LNX蛋白可以分別和Numb蛋白、SKIP蛋白和PBK蛋白共定位于細(xì)胞核。我們推測(cè)，LNX蛋白可能通過(guò)其PDZ結(jié)構(gòu)域募集相關(guān)蛋白到特定的細(xì)胞內(nèi)區(qū)域組成蛋白復(fù)合體，參與包括Notch途徑在內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。
【學(xué)位單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類】：Q987
【部分圖文】：

人LNX蛋白與小鼠Lnx蛋白氨基酸同源比較結(jié)果

3 LNX 的表達(dá)譜分析3.1 Northern 表達(dá)譜分析用 LNX 基因特異引物從 pBS-LNX建庫(kù)質(zhì)粒中擴(kuò)增得到 1.8 kb 的 PCR 產(chǎn)物 用隨機(jī)引物標(biāo)記法摻入同位素制成 LNX 基因特異性探針 將此探針對(duì)Clontech 公司 MTN I 膜進(jìn)行雜交 雜交結(jié)果用磷屏放射自顯影后用 CyclonStorage Phosphor System 掃描磷屏 圖 6 根據(jù)雜交信號(hào)在不同組織中的強(qiáng)弱程度 我們推斷人類 LNX 基因 mRNA 在腦 胎盤(pán)腎臟以及胰臟這些組織中的表達(dá)量較高 在圖 6 中可以看到存在 3 種轉(zhuǎn)錄本 大小分別為 2.6 kb 2.8 k和 4.0 kb 提示 LNX 基因可能存在 3 種剪接形式 2.6 kb 和 4.0 kb 的轉(zhuǎn)錄本在腦組織中存在 而在心臟 胎盤(pán) 腎臟和胰臟中則表達(dá) 2.8 kb 的轉(zhuǎn)錄本 LNX在腦組織中的表達(dá)特殊性顯示其有可能在腦中起重要作用 值得注意的是 4.0 k圖 5. 人 LNX 基因的染色體結(jié)構(gòu)示意圖

蛋白與 PBK 蛋白相互作用的驗(yàn)證了驗(yàn)證酵母雙雜交得到的相互作用蛋白在體外是否可以和 L預(yù)吸附有純化的 GST GST-PBK 融合蛋白的 Santa Cruz的表達(dá)有 MBP-PDZ1 的細(xì)菌破菌上清共置過(guò)夜 將 GST-AgaDS-PAGE電泳分離后電轉(zhuǎn)印 PVDF 膜上 然后用 New Eng 多克隆抗體進(jìn)行 Western 檢測(cè) 在 PVDF 上對(duì)應(yīng) MBP-PD現(xiàn)一條分子量約為 50 kDa 的明顯條帶 與 MBP-PDZ1 的預(yù)互吻合 圖 15 而在 GST 的對(duì)應(yīng)位置則沒(méi)有對(duì)應(yīng)條帶 X蛋白可以通過(guò)其 PDZ1 結(jié)構(gòu)域與 PBK 蛋白特異性結(jié)合真核表達(dá) Numb 蛋白與(1) MBP, (3) MBP- LNX, (4) MBP-LNX-Nter合實(shí)驗(yàn)結(jié)果 轉(zhuǎn)染 Numb 的 HEK293 細(xì)胞全細(xì)胞裂解液(2)作為對(duì)照
【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 肖迎,唐仕波;Notch-Delta信號(hào)系統(tǒng)與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育[J];解剖學(xué)研究;2005年02期

2 朱長(zhǎng)庚;;星形膠質(zhì)細(xì)胞[J];解剖學(xué)報(bào);1990年04期

3 曾憲智,康仲涵,張更;胎兒側(cè)腦室室管膜發(fā)育的免疫組織化學(xué)和電鏡研究[J];解剖學(xué)雜志;2004年04期

4 李雪玲;第Ⅵ類中間絲蛋白—Nestin[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2003年01期

本文編號(hào)：2876771