發(fā)布時(shí)間：2020-11-07 11:24

　　 目的 建立DEN誘發(fā)性肝癌動(dòng)物模型，不同時(shí)間點(diǎn)（11、15及20周末）觀察大鼠癌變過(guò)程中組織形態(tài)變化；并檢測(cè)P53、P21、STAT3和CyclinD1在DEN誘發(fā)肝癌大鼠組織中基因mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)表達(dá)水平，探討P53、P21、CyclinD1和STAT3在肝癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及可能的機(jī)制。 方法 1.將60只大鼠隨機(jī)分為肝癌模型組（36只）和對(duì)照組（24）；肝癌模型組自由飲用用滅菌蒸餾水配置的DEN（0.1mg/mL）溶液，對(duì)照組飲用滅菌的蒸餾水，連續(xù)飲用20周，各組在11周和15周各處死6只，到20周處死所有大鼠； 2.采用光學(xué)顯微鏡觀察模型建立第11、15及20周末等不同時(shí)間點(diǎn)肝臟組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化； 3.采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）法檢測(cè)DEN誘發(fā)肝癌模型組肝臟p53，P21，CyclinD1和STAT3基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平； 4.采用蛋白質(zhì)印跡法（western blotting）檢測(cè)DEN誘發(fā)肝癌模型組肝臟組織中p53，P21，CyclinD1和STAT3蛋白表達(dá)水平； 5.采用免疫組織化學(xué)SP法進(jìn)一步檢測(cè)正常組和DEN誘發(fā)肝癌模型組大鼠中p53，P21，CyclinD1和STAT3蛋白表達(dá)水平和細(xì)胞中表達(dá)位置； 6.應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)結(jié)果并進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析（Spearman correlation coefficients test)，P0.05表示有顯著性差異，P0.01表示有極顯著性差異，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1.肝臟組織大體觀察結(jié)果顯示，隨著DEN誘發(fā)肝癌時(shí)間的延長(zhǎng)，組織表面開(kāi)始粗糙、顏色變暗、質(zhì)地較硬、邊緣變鈍，到20周時(shí)組織表面出現(xiàn)大小不一的灰白色病灶。組織形態(tài)變化結(jié)果顯示，隨著時(shí)間的推移，肝臟組織經(jīng)過(guò)損傷、增生、肝硬化，到20周時(shí)3例為肝硬化，8例為肝癌； 2. RT-PCR數(shù)據(jù)用各指標(biāo)和β肌動(dòng)蛋白（β-actin）瓊脂糖電泳條帶灰度值的平均值的比值來(lái)表示，肝癌模型組P53基因轉(zhuǎn)錄水平為0.87±0.03，與正常組（0.39±0.03）相比明顯高（p0.01）；肝癌模型組P21基因mRNA表達(dá)量（0.51±0.05）高于正常組（0.69±0.02），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）；肝癌模型組STAT3基因mRNA表達(dá)量（0.31±0.02），與正常組（0.05±0.008）相比明顯增高（p0.01）；CyclinD1mRNA的表達(dá)量（0.79±0.02）與正常組相比（0.66±0.03）也顯著升高（p0.05）； 3. Western blot數(shù)據(jù)用各指標(biāo)和甘油醛-3-磷酸脫氫酶（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase GAPDH）條帶灰度值的平均值的比值來(lái)表示，P53和在肝癌模型組中條帶強(qiáng)度的比值平均值(0.45±0.16)，與正常組（0.2±0.09）相比明顯高（p0.01）；肝癌模型組P21蛋白表達(dá)量（0.91±0.19）也升高，與正常組（0.51±0.14）比較有顯著差異（p0.01）；肝癌模型組STAT3蛋白表達(dá)量（0.58±0.08），與正常組STAT3蛋白表達(dá)量（0.37±0.09）相比有顯著性差異（p0.05）；肝癌模型組CyclinD1蛋白表達(dá)量（0.65±0.1）明顯高于正常組（0.42±0.11）（p0.05）； 4.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，肝癌動(dòng)物模型組織中P53、P21、STAT3和CyclinD1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為73%、64%、73%和55%，肝癌動(dòng)物模型組和正常組的平均光密度和值P53分別為404.22±32.98和73.01±6.2、P21分別為279±22.51和6.81±2.03、STAT3分別為4878±55.08和2373±58.8、CyclinD1分別為668.4±23.09和138.86±31.49，各指標(biāo)在肝癌動(dòng)物模型組蛋白表達(dá)水平與正常組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.01）； 5.各指標(biāo)蛋白陽(yáng)性表達(dá)率相關(guān)性分析結(jié)果顯示，P53與P21沒(méi)有相關(guān)性（p0.05），P53與CyclinD1、STAT3與CyclinD1正相關(guān)（p0.05），P53與STAT3、P21與CyclinD1、STAT3負(fù)相關(guān)（p0.05）。 結(jié)論 肝癌模型大鼠組肝臟組織中P53、P21、STAT3和CyclinD1基因表達(dá)水平上調(diào)，提示可能P53、P21、STAT3和CyclinD1基因表達(dá)水平的改變及其相互作用在DEN誘導(dǎo)的大鼠肝癌模型中促進(jìn)肝癌的發(fā)生、發(fā)展。
【學(xué)位單位】：新疆大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類(lèi)】：R735.7;R-332
【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
第二章 DEN誘發(fā)性肝癌動(dòng)物模型的建立及其肝臟組織形態(tài)變化
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 主要試劑和器材
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 動(dòng)物模型的建立
        2.2.2 組織病理蘇木素-伊紅（Hematoxylin and Eosin HE ）染色
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 大鼠肝臟大體觀察結(jié)果
        2.3.2 組織形態(tài)學(xué)病理變化
    2.4 討論
第三章 P53、P21、CYCLIND1 和 STAT3 基因及其蛋白表達(dá)水平
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 RT-PCR 法檢測(cè) P53、P21、STAT3 和 CyclinD1 等基因 mRNA 水平
        3.2.2 western blot 法檢測(cè) P53、P21、STAT3 和 CyclinD1 蛋白表達(dá)水平
        3.2.3 免疫組織化學(xué)法檢測(cè) P53、P21、STAT3 和 CyclinD1 蛋白表達(dá)水平
    3.3 統(tǒng)計(jì)方法
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.4.1 肝癌動(dòng)物模型大鼠肝臟組織中 P53、P21、STAT3 和 CyclinD1 基因 mRNA 轉(zhuǎn)錄情況
        3.4.2 肝癌動(dòng)物模型大鼠肝臟組織中 P53、P21、STAT3 和 CyclinD1 蛋白表達(dá)情況（Westernblot 檢測(cè)結(jié)果）
        3.4.3 肝癌動(dòng)物模型大鼠肝臟組織中 P53、P21、STAT3 和 CyclinD1 蛋白表達(dá)情況（免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果）
        3.4.4 肝癌動(dòng)物模型大鼠肝臟組織中 P53、P21、STAT3 和 CyclinD1 蛋白表達(dá)水平相關(guān)性
    3.5 討論
第四章 全文總結(jié)和展望
    4.1 全文總結(jié)
    4.2 本實(shí)驗(yàn)研究問(wèn)題
參考文獻(xiàn)
附錄1
附錄2
在讀期間發(fā)表論文清單
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2873876