目的：探討algR基因在銅綠假單胞菌生物被膜播種型擴散中的作用及機制。 方法：采用同源重組的方法敲除PAO1和PA17染色體中的algR基因,得到PAO1和PA17的algR基因敲除的同源重組菌PSL317和PA17’；分別在PSL317和PA17’中通過電轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)入質(zhì)粒pVDtacPIL(含有鞭毛和Ⅳ型菌毛基因)、pVDZ'2R(含有algR基因)和pEX1.8-rhlAB(含有rh1AB基因及rhlA啟動子)。使用改良平板培養(yǎng)法建立PA17、PAO1、PSL317、PA17、PAOmucA56及各同源重組菌株的生物膜體外模型,觀察各個菌株間生物被膜生長和播種型擴散的異同；RT-PCR檢測各菌株algR基因在生物被膜生長過程中不同時間點(1,3,5,7,9,12天)的表達量；RT-PCR檢測PAO1和PAOmucA56在生物被膜生長過程中不同時間點(1,3,5,7,9,12天)QS系統(tǒng)rhlA/B基因的表達量；在瓊脂平板上觀察PA17、PAO1、PSL317、PA17'及各同源重組菌株的游泳、群游、顫搐運動能力的差別。 結(jié)果：PAO1于第12天發(fā)生播種型擴散,PA17于第7天發(fā)生播種型擴散；PA17的algR基因在第7天時最高,PAO1則在第11天時最高；PAO1的swimming、swarming以及twitching能力均強于PA17。PSL317相關(guān)實驗菌株較PA17’相關(guān)實驗菌株播種型擴散時間晚、運動能力強。PAOmucA56于第7天發(fā)生播種型擴散；PAOmucA56的algR基因在第7天時最高,PAO1則在第11天時最高；PAO1的rhlA在第11天表達最高,PAOmucA56的rhlA在第3天表達最高；PAO1的rhlB在第11天表達最高,PAOmucA56的rhlB在第9天表達最高。 結(jié)論：證實了algR基因的高表達可促進銅綠假單胞菌的生物膜播種型擴散；algR基因影響生物被膜形成的基因調(diào)節(jié)通路中,rhlA/B通路可能有較大意義。
【學位單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2013
【中圖分類】：R378.991
【文章目錄】：
前言
    參考文獻
中文摘要
Abstract
第一部分 PAO1和PA17在生物被膜播種型擴散和運動性上的差異
    摘要
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻
第二部分 PSL317和PA17’在生物被膜播種型擴散和運動性上的差異
    摘要
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻
第三部分 PAO1和PAOmucA56在生物被膜播種型擴散和運動性上的差異
    摘要
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻
全文總結(jié)
綜述
    參考文獻
縮略詞表
附錄
致謝

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