目的優(yōu)化熒光素酶生物發(fā)光報(bào)告體系條件,提高基于熒光素酶生物發(fā)光活體成像技術(shù)在活體腫瘤研究中的檢測(cè)靈敏性和應(yīng)用潛力。方法在一定數(shù)目穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的肝癌細(xì)胞(HepG2-Luc)基礎(chǔ)上(固定熒光素酶量)進(jìn)行體外luciferin和ATP的最佳濃度優(yōu)化,以此優(yōu)化條件進(jìn)行荷瘤裸鼠活體成像靈敏度檢測(cè)和發(fā)光強(qiáng)度分析。結(jié)果 Luciferin的最佳濃度是1.25 mg/ml,ATP緩沖液的最佳濃度是12.5μM�；铙w成像實(shí)驗(yàn)顯示,未使用優(yōu)化體系時(shí),將2×106肝癌細(xì)胞皮下注射后檢測(cè)到的光強(qiáng)度為484645,使用優(yōu)化體系進(jìn)行檢測(cè)的發(fā)光強(qiáng)度為1483024;對(duì)荷瘤裸鼠進(jìn)行檢測(cè)時(shí),未使用優(yōu)化體系時(shí)的實(shí)驗(yàn)鼠與對(duì)照鼠的信號(hào)強(qiáng)度比值為0.11,而優(yōu)化后的比值增加為0.67,說明以此配比優(yōu)化的熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)能夠明顯提高裸鼠體內(nèi)腫瘤的檢出靈敏度,延長(zhǎng)發(fā)光時(shí)間。結(jié)論應(yīng)用我們建立的熒光素酶生物發(fā)光報(bào)告體系優(yōu)化方法可以顯著提高肝癌荷瘤裸鼠活體成像檢測(cè)的靈敏度。
【文章目錄】：
1 對(duì)象與方法
    1.1 細(xì)胞、動(dòng)物、儀器與試劑
    1.2 HepG2-Luc細(xì)胞luciferin最佳反應(yīng)濃度的優(yōu)化
    1.3 ATP最佳反應(yīng)濃度的優(yōu)化
    1.4 裸鼠腫瘤皮下注射
    1.5 活體成像儀檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 Luciferin最佳濃度的篩選情況
    2.2 ATP緩沖液最佳濃度的篩選情況
    2.3 熒光素酶優(yōu)化報(bào)告系統(tǒng)對(duì)裸鼠皮下接種腫瘤細(xì)胞活體成像靈敏度的影響
    2.4 熒光素酶優(yōu)化報(bào)告系統(tǒng)對(duì)裸鼠皮下移植瘤生物發(fā)光成像的影響
3 討論

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本文編號(hào)：2871473