目的：1.觀察chemerin及其受體chemerinR基因在小鼠各臟器中的表達情況；探討3T3-L1脂肪細胞分化成熟過程中chemerin及其受體基因表達的變化。2.探討PPAR-γ激動劑——羅格列酮對3T3-L1脂肪細胞chemerin及其受體基因表達的影響。3.重組chemerin蛋白對3T3-L1前脂肪細胞分化的影響并觀察其對脂聯(lián)素、瘦素和PPAR-γ2等基因表達的影響。 方法：1.提取正常小鼠肝臟、脂肪、胃、脾臟、腎臟、心臟、骨骼肌等臟器組織中總RNA,采用半定量RT-PCR技術檢測其中chemerin及chemerinR基因表達水平；體外培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細胞并誘導分化,實時熒光定量PCR法檢測誘導分化過程中不同天數(shù)(0、2、4、6、8、10天)chemerin和chemerinR基因的表達變化。2.3T3-L1細胞誘導分化至第10天為正常對照組；另一組在誘導分化過程中用10μM羅格列酮干預。采用實時熒光定量PCR法檢測不同天數(shù)(0、2、4、6、8、10天)chemerin和chemerinR基因表達情況。3T3-L1脂肪細胞誘導成熟后,分別以不同濃度梯度(0、0.μM、1μM、10μM)的羅格列酮干預24小時后收集細胞,實時熒光定量PCR法檢測chemerin和chemerinR基因的表達情況。3.3T3-L1細胞誘導分化至第10天為正常對照組；一組誘導分化過程中用羅格列酮干預；另一組予以chemerin蛋白干預。采用實時熒光定量PCR法檢測第10天PPAR-γ2、C/EBPa基因以及adiponectin、leptin基因表達情況。3T3-L1細胞誘導成熟后,分別以不同濃度梯度(0、2.5ng/m1、25 ng/ml、50 ng/m1)的chemerin蛋白作用24小時后收集細胞,實時熒光定量PCR法檢測PPAR-γ2、C/EBPa基因以及adiponectin、leptin基因的表達情況。 結果：1、chemerin及其受體基因在小鼠肝臟、脂肪、胃、脾臟、腎臟、心臟、骨骼肌中均有表達；chemerin及chemerinR基因低表達于3T3-L1前體脂肪細胞中,并隨前體脂肪細胞誘導分化成熟表達水平呈逐漸上調趨勢(P0.05)。2、與對照組相比羅格列酮組對3T3-L1前脂肪細胞誘導分化過程中及成熟的3T3-Ll脂肪細胞chemerin和chemerinR基因均起上調作用(P0.05)。3、與對照組相比在3T3-L1細胞誘導分化過程中第10天羅格列酮干預組、chemerin蛋白組均上調PPAR-γ2、C/EBPa、adiponectin、leptin基因的表達(p＜0.05)。3T3-L1細胞誘導分化成熟后,與對照組相比chemerin蛋白組上調了PPARγy 2、C/EBPa及adiponectin、leptin基因的表達(p0.05)。 結論：1.chemerin及其受體基因在小鼠脂肪組織中均有表達；在3T3-L1脂肪前體細胞分化過程中,chemerin及其受體基因表達逐漸上調。2.PPAR-Y激動劑-羅格列酮上調chemerin、chemerinR基因的表達。3.chemerin蛋白上調成熟3T3-L1脂肪細胞中PPAR-γ2、C/EBPa及adiponectin、leptin基因的表達。
【學位單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2010
【中圖分類】：R363
【部分圖文】：

RNA電泳圖

A260/A28O在 1.8一2.0之間，說明RNA提取效率較好，純度符合實驗要求。二.小鼠各臟器ehemerin及ehemerinR表達情況如圖2所示，chemerin及chemerinR基因在小鼠體內(nèi)廣泛表達，兩者在脂肪組織中均有表達。p一ac” n(550bp)e卜eme而n(3弓sbP) 2345678圖2(A)小鼠臟器組織chemerin基因表達電泳圖l一8泳道依次為:骨骼肌、胃、脾、’腎臟、Marker、脂肪、心臟和盯臟p一ac‘。(349bp)chemen吸(119bP)圖2(B)小鼠臟器組織ehemeri。、ChemerinR從防!表達電泳l到l一8泳道依次為:骨骼j刀L、胃、脾、’{圣臟、Marker、脂肪、心臟和)11幾J樁

A260/A28O在 1.8一2.0之間，說明RNA提取效率較好，純度符合實驗要求。二.小鼠各臟器ehemerin及ehemerinR表達情況如圖2所示，chemerin及chemerinR基因在小鼠體內(nèi)廣泛表達，兩者在脂肪組織中均有表達。p一ac” n(550bp)e卜eme而n(3弓sbP) 2345678圖2(A)小鼠臟器組織chemerin基因表達電泳圖l一8泳道依次為:骨骼肌、胃、脾、’腎臟、Marker、脂肪、心臟和盯臟p一ac‘。(349bp)chemen吸(119bP)圖2(B)小鼠臟器組織ehemeri。、ChemerinR從防!表達電泳l到l一8泳道依次為:骨骼j刀L、胃、脾、’{圣臟、Marker、脂肪、心臟和)11幾J樁
【參考文獻】

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本文編號：2866591