目的:研究Tribble同源蛋白3(TRIB3)對新生大鼠海馬神經(jīng)元細胞缺氧缺血后細胞增殖和凋亡的影響,為TRIB3在新生兒缺氧缺血性腦損傷治療方面提供初步的實驗依據(jù)。方法:無血清法培養(yǎng)新生大鼠海馬神經(jīng)元細胞,氧糖剝奪(OGD)法體外模擬新生兒缺氧缺血性腦損傷細胞模型,Western blot和qRT-PCR檢測OGD后海馬神經(jīng)元細胞中TRIB3蛋白和mRNA表達情況; TRIB3 siRNA或毒胡蘿卜素(Tg)處理OGD海馬神經(jīng)元細胞并培養(yǎng)24 h,Western blot檢測TRIB3的蛋白表達水平。采用MTT檢測細胞存活率,Western blot檢測凋亡相關(guān)基因(Bax、Caspase-3和Bcl-2)以及NF-κB的蛋白表達水平。結(jié)果:與正常對照組(Control)比較,OGD后海馬神經(jīng)元細胞TRIB3蛋白和mRNA表達水平顯著升高(P 0. 05); TRIB3 siRNA顯著降低TRIB3蛋白表達水平,并促進OGD后海馬神經(jīng)元細胞增殖; TRIB3 siRNA顯著增加Bcl-2/Bax比值,而顯著降低Caspase-3蛋白表達水平(P 0. 05); TRIB3低表達顯著抑制NF-κB表達(P 0. 05);另外,Tg逆轉(zhuǎn)TRIB3 siRNA對NF-κB蛋白表達的抑制作用。結(jié)論:TRIB3沉默促進缺氧缺血后海馬神經(jīng)元細胞增殖、抑制細胞凋亡,其機制與抑制NF-κB蛋白表達水平相關(guān)。
【部分圖文】：

x±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗。P＜0．05為差異有統(tǒng)計學意義。2結(jié)果2．1OGD后海馬神經(jīng)元細胞中TＲIB3表達情況Westernblot結(jié)果顯示(圖1A)，與Control組比較，OGD組TＲIB3蛋白表達水平顯著升高(P＜0.05)。qＲT-PCＲ結(jié)果顯示(圖1B)，與Control組比較，OGD組TＲIB3mＲNA表達水平明顯增加(P＜0.05)。此外，與siNC組比較，TＲIB3siＲNA顯著降低TＲIB3基因的表達水平(P＜0．05)。*P＜0．05圖1OGD后海馬神經(jīng)元細胞中TＲIB3基因表達的比較2．2TＲIB3低表達促進OGD后海馬神經(jīng)元細胞增殖MTT檢測結(jié)果顯示(圖2):與siNC組比較，siTＲIB3組細胞存活率顯著增加(P＜0．05)。*P＜0．05圖2TＲIB3低表達促進OGD后海馬神經(jīng)元細胞增殖2．3TＲIB3低表達抑制OGD后海馬神經(jīng)元細胞凋亡Westernblot檢測結(jié)果顯示(圖3):與Control組比較，OGD組Bcl-2/Bax比率顯著降低(P＜0．05)，Caspase3表達顯著升高(P＜0．05)。與siNC組比較，TＲIB3siＲNA組Bcl-2/Bax比率顯著增加(P＜0．05)，而Caspase3蛋白表達水平顯著降低(P＜0．05)。2．4TＲIB3低表達可以抑制NF-κB活化水平Westernblot實驗結(jié)果顯示(圖4):與siNC組比較，TＲIB3siＲNA組NF-κB蛋白水平顯著降低(P＜0.05)。此外，與siTＲIB3組比較，加入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導物Tg之后，NF-κB蛋白表達水平顯著上升(P＜0.05)。3討論本研究發(fā)現(xiàn)海馬神經(jīng)元細胞在缺氧缺血后TＲIB3蛋白和mＲNA表達水平顯著升高

楸冉希?OGD組TＲIB3蛋白表達水平顯著升高(P＜0.05)。qＲT-PCＲ結(jié)果顯示(圖1B)，與Control組比較，OGD組TＲIB3mＲNA表達水平明顯增加(P＜0.05)。此外，與siNC組比較，TＲIB3siＲNA顯著降低TＲIB3基因的表達水平(P＜0．05)。*P＜0．05圖1OGD后海馬神經(jīng)元細胞中TＲIB3基因表達的比較2．2TＲIB3低表達促進OGD后海馬神經(jīng)元細胞增殖MTT檢測結(jié)果顯示(圖2):與siNC組比較，siTＲIB3組細胞存活率顯著增加(P＜0．05)。*P＜0．05圖2TＲIB3低表達促進OGD后海馬神經(jīng)元細胞增殖2．3TＲIB3低表達抑制OGD后海馬神經(jīng)元細胞凋亡Westernblot檢測結(jié)果顯示(圖3):與Control組比較，OGD組Bcl-2/Bax比率顯著降低(P＜0．05)，Caspase3表達顯著升高(P＜0．05)。與siNC組比較，TＲIB3siＲNA組Bcl-2/Bax比率顯著增加(P＜0．05)，而Caspase3蛋白表達水平顯著降低(P＜0．05)。2．4TＲIB3低表達可以抑制NF-κB活化水平Westernblot實驗結(jié)果顯示(圖4):與siNC組比較，TＲIB3siＲNA組NF-κB蛋白水平顯著降低(P＜0.05)。此外，與siTＲIB3組比較，加入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導物Tg之后，NF-κB蛋白表達水平顯著上升(P＜0.05)。3討論本研究發(fā)現(xiàn)海馬神經(jīng)元細胞在缺氧缺血后TＲIB3蛋白和mＲNA表達水平顯著升高。TＲIB3低表達促進缺氧缺血后海馬神經(jīng)元細胞增殖，增加Bcl/Bax比值，·229·現(xiàn)代醫(yī)學(ModernMedicalJournal)2019年8月，47(8)

*P＜0．05圖3TＲIB3低表達抑制OGD后海馬神經(jīng)元細胞凋亡*P＜0．05圖4TＲIB3低表達抑制NF-κB蛋白表達水平降低Caspase-3蛋白表達水平并抑制NF-κB蛋白表達。另外，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導物Tg可以逆轉(zhuǎn)TＲIB3沉默對NF-κB蛋白表達的抑制作用。研究結(jié)果表明TＲIB3低表達促進缺氧缺血后海馬神經(jīng)元細胞增殖、抑制細胞凋亡，其機制與抑制NF-κB蛋白表達水相關(guān)。TＲIB3是TＲIB基因家族成員之一，在哺乳動物體內(nèi)，該家族成員有三個，分別是TＲIB1、TＲIB2和TＲIB3，其中研究最多的是TＲIB3。TＲIB3首次是在果蠅中發(fā)現(xiàn)的一種抑制有絲分裂的絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶［8］。近年來，研究發(fā)現(xiàn)，TＲIB3在不同器官組織細胞中差異性表達。在胃癌［9］、結(jié)直腸癌［10］、肺癌和食管癌［11］等不同癌癥中，TＲIB3表達水平中顯著升高。在脫髓鞘的突變鼠髓磷脂分解過程中，TＲIB3的表達顯著上升［12］。此外，TＲIB3的蛋白表達在帕金森癥患者黑質(zhì)致密部的多巴胺能神經(jīng)元中顯著上調(diào)，同時在帕金森細胞模型中也增加［13］。然而，TＲIB3在新生兒缺氧缺血性腦損傷中的表達情況未見報道。于是，我們采用缺氧缺血誘導海馬神經(jīng)元細胞建立新生兒缺氧缺血性腦損傷模型，并采用Westernblot和qＲT-PCＲ檢測了TＲIB3的表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn)缺氧缺血后海馬神經(jīng)元細胞TＲIB3蛋白和mＲNA表達水平顯著升高，提示TＲIB3差異性表達也與新生兒缺氧缺血性腦損傷有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)［14-15］，HIBD可以導致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，進而啟動神經(jīng)細胞凋亡。此外，F(xiàn)ang等［
【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 閻雯;楊雪峰;;TRIB3沉默對缺氧-缺血新生大鼠海馬神經(jīng)元細胞凋亡的影響[J];現(xiàn)代醫(yī)學;2019年08期

2 陳培;郭艷琴;張春軍;初彥輝;;原代培養(yǎng)新生大鼠海馬神經(jīng)元實驗技術(shù)的建立[J];牡丹江醫(yī)學院學報;2011年03期

3 帥智峰;費洪新;王紹清;柏青楊;張曉杰;;雌二醇對Aβ1-42誘導小鼠海馬神經(jīng)元細胞的影響[J];中國醫(yī)藥導報;2012年16期

4 李文建;李易明;李勇;王冀;劉釗;;胱硫醚γ-裂解酶在缺氧缺血性腦病新生大鼠腎細胞凋亡中的作用[J];河北醫(yī)藥;2014年14期

5 王雪琦,孫學軍,何成,路長林;睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子對皮質(zhì)酮致海馬神經(jīng)元損傷的保護作用[J];第二軍醫(yī)大學學報;2000年05期

6 鄭敏;郭蓮軍;呂青;何治;徐旭林;喻欣;宗賢剛;;大鼠皮質(zhì)及海馬神經(jīng)元體外缺氧缺糖模型建立[J];中國老年學雜志;2006年03期

7 楊明峰;張顏波;管宏旭;牛敬忠;;大鼠鼠胚海馬神經(jīng)元缺氧復氧致細胞凋亡模型的建立[J];泰山醫(yī)學院學報;2008年12期

8 韓明飛;高東;孫學禮;;應(yīng)激與海馬神經(jīng)元再生障礙[J];華西醫(yī)學;2009年02期

9 黃鳳玲,向宇燕,陳鋒菊;鎂離子在0.1mmol/L谷氨酸誘發(fā)的體外海馬神經(jīng)元損傷中的作用(英文)[J];中國臨床康復;2004年01期

10 陳雪紅,吳飏飏,姜國湖;睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子對N-甲基-D-天冬氨酸引起海馬神經(jīng)元內(nèi)鈣離子濃度升高的影響[J];青島大學醫(yī)學院學報;2003年02期

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 趙宇昊;在STZ糖尿病大鼠模型中，長非編碼RNA H19通過Wnt信號傳導通路誘導海馬神經(jīng)元凋亡的相關(guān)研究[D];吉林大學;2018年

2 高英;酸敏感離子通道的裝配及其在海馬神經(jīng)元樹突發(fā)育中的作用[D];浙江大學;2008年

3 沈逸;白細胞介素-2對離子型谷氨酸受體功能以及培養(yǎng)海馬神經(jīng)元樹突發(fā)育、突觸發(fā)生的影響[D];浙江大學;2008年

4 魏薇;我國優(yōu)勢基因型弓形蟲蟲株致密顆粒蛋白15誘導人絨毛膜細胞JEG-3凋亡的機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2018年

5 陳瑋;骨髓基質(zhì)細胞來源的新型凋亡誘導分子LAPF的功能研究：LAPF募集磷酸化p53（ser-15）至溶酶體介導的細胞凋亡通路[D];浙江大學;2004年

6 陳金中;人類RBBP10和bima3的克隆和功能研究[D];復旦大學;2004年

7 郭鴻涌;工頻勻強磁場對正常細胞和腫瘤細胞凋亡與增殖影響的研究[D];河北工業(yè)大學;2004年

8 李愛玲;eIF-5A調(diào)控p53和p53依賴的細胞凋亡[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2004年

9 肖衛(wèi)民;熱休克蛋白對過氧化氫所致心肌細胞凋亡的影響及其機制研究[D];中南大學;2003年

10 王太宇;Hsp90在熱誘導Jurkat細胞凋亡中功能的初探[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2001年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 吳飏飏;睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子對谷氨酸離子型受體引起的海馬神經(jīng)元內(nèi)鈣離子濃度升高的快速調(diào)節(jié)[D];青島大學;2001年

2 陸曉妹;雷公藤單體T10和T4對APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠海馬神經(jīng)元neuroligin-1表達的影響及其表觀遺傳機制[D];南昌大學;2019年

3 何禎;海馬神經(jīng)元雄激素膜結(jié)合位點的研究及其介導的CaM/CaMKⅡ信號通路對突觸蛋白PSD95的影響[D];河北醫(yī)科大學;2018年

4 田彥鵬;海馬CA1區(qū)特異性敲除FGF13對小鼠行為學的影響及機制的研究[D];河北醫(yī)科大學;2018年

5 胡玉燕;傷害性信息傳入誘導海馬神經(jīng)元凋亡及其機制初探[D];河北醫(yī)科大學;2006年

6 李婷;綠膿菌素通過線粒體損傷和細胞內(nèi)Ca~(2+)的升高誘導NK92細胞凋亡[D];杭州師范大學;2019年

7 李明達;免疫共沉淀聯(lián)合質(zhì)譜鑒定DAI相互作用蛋白[D];廈門大學;2018年

8 武珍;FOXO3a上調(diào)Mxi1-0促進缺氧后內(nèi)皮細胞凋亡[D];南京醫(yī)科大學;2019年

9 任倩;FTO通過抑制線粒體UPR緩解小鼠脂肪細胞凋亡的作用機制[D];西北農(nóng)林科技大學;2019年

10 楊瑜;寬頻電磁脈沖對人羊膜上皮細胞凋亡及胞內(nèi)鈣離子的影響[D];華東師范大學;2019年

本文編號：2866697