背景與目的：睪丸局部炎癥反應(yīng)以及系統(tǒng)性炎癥疾病均可以干擾睪丸的功能,導(dǎo)致精子發(fā)生受損,引起暫時性和永久性的不育。在哺乳動物精子發(fā)生過程中,約有75%的生精細(xì)胞發(fā)生凋亡,其余的在分化為成熟精子前,大部分胞質(zhì)脫落形成殘體。Sertoli細(xì)胞作為曲細(xì)精管中具有吞噬功能的上皮細(xì)胞,能夠吞噬并降解這些凋亡的生精細(xì)胞和殘體。以前的結(jié)果集中在正常情況下Sertoli細(xì)胞吞噬凋亡生精細(xì)胞的研究上,但是睪丸在發(fā)生炎癥的情況下對Sertoli細(xì)胞吞噬凋亡生精細(xì)胞所產(chǎn)生的影響尚未研究。本論文研究了Toll樣受體4(TLR4)信號通路的激活對Sertoli細(xì)胞吞噬凋亡生精細(xì)胞能力的調(diào)節(jié)作用。 材料與方法：分離小鼠Sertoli細(xì)胞,用其特異性標(biāo)志物WTl的抗體鑒定細(xì)胞純度；RT-PCR檢測TLR受體在小鼠Sertoli細(xì)胞的表達(dá)檢測；通過免疫組化染色和Western blotting方法分析Tyro3亞家族三個受體在Sertoli細(xì)胞上的表達(dá)情況；分離小鼠生精細(xì)胞,體外培養(yǎng)使其自然凋亡,用AO/EB染色法檢測其凋亡率；Sertoli細(xì)胞與凋亡生精細(xì)胞體外共培養(yǎng),利用油紅O染色檢測脂滴形成的方法來評價Sertoli細(xì)胞的吞噬能力；利用LPS處理Sertoli細(xì)胞激活TLR4信號通路。 結(jié)果：Tyro3亞家族受體三個成員均在Sertoli細(xì)胞上表達(dá)。其中,Mer對于啟動激活Sertoli細(xì)胞吞噬過程是必需的。并且,加入外源性Gas6可以有效的促進(jìn)原代Sertoli細(xì)胞吞噬凋亡生精細(xì)胞。本文發(fā)現(xiàn)Sertoli細(xì)胞上的TLR4被其配體LPS激活后可以特異性抑制Sertoli細(xì)胞吞噬凋亡生精細(xì)胞,并且這種抑制作用依賴于NF-κB的活化。LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞因子TNF-a以自分泌的方式抑制Sertoli細(xì)胞吞噬凋亡生精細(xì)胞。另外,LPS通過激活TLR4來抑制Sertoli細(xì)胞中Gas6及Mer的表達(dá),進(jìn)一步抑制Sertoli細(xì)胞吞噬凋亡生精細(xì)胞的能力。 結(jié)論：LPS通過激活TLR4信號通路來誘導(dǎo)TNF-α,抑制Gas6和Mer的表達(dá),從而抑制Sertoli細(xì)胞吞噬凋亡生精細(xì)胞的能力。凋亡生精細(xì)胞不能被及時吞噬,會進(jìn)一步壞死,從而誘導(dǎo)針對自身抗原的內(nèi)源性炎癥反應(yīng),擴(kuò)大對生精細(xì)胞的損傷。結(jié)果表明炎癥反應(yīng)可通過抑制Sertoli細(xì)胞的吞噬能力損害精子發(fā)生。
【學(xué)位單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R329.2
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語表
前言
實驗材料
實驗方法
實驗結(jié)果
    第一部分 TLRs在小鼠Sertoli細(xì)胞的表達(dá)
    第二部分 Tyro3受體及其配體Gas6調(diào)節(jié)Sertoli細(xì)胞的吞噬能力
    第三部分 TLR4對Sertoli細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)
討論
全文小結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2866273