瘧疾是目前地球上對(duì)人類危害最嚴(yán)重的蚊媒寄生原蟲(chóng)病。全世界每年有3至5億人受到瘧原蟲(chóng)感染，二百至三百余萬(wàn)人死于惡性瘧疾，其中80％是五歲以下兒童。瘧原蟲(chóng)是瘧疾的病原體，寄生于人體的瘧原蟲(chóng)共有4種，惡性瘧原蟲(chóng)是其中最致命的一種。由于惡性瘧原蟲(chóng)對(duì)現(xiàn)有藥物的抗藥性不斷出現(xiàn)和蔓延，蚊媒對(duì)殺蟲(chóng)劑抗藥性的產(chǎn)生等因素影響，加上迄今尚無(wú)有效的瘧疾疫苗出現(xiàn)，致使對(duì)瘧疾的控制成為世界性的大難題之一。 對(duì)瘧疾的防治是多種多樣的，可以針對(duì)不同的發(fā)育階段和傳播環(huán)節(jié)采取不同的措施。目前公認(rèn)最有發(fā)展前景的策略包括：1)能夠有效抑制瘧原蟲(chóng)的某一特殊生命過(guò)程的藥物；2)具有預(yù)防及治療作用的疫苗。 惡性瘧原蟲(chóng)Pfdyn是本實(shí)驗(yàn)篩選出的新蟲(chóng)源基因，前期工作證明對(duì)瘧原蟲(chóng)的生存至關(guān)重要。為了更深入地了解其功能，本文在原核系統(tǒng)中表達(dá)了Pfdyn基因的不同結(jié)構(gòu)域，著重觀察了編碼蛋白中特異性的C末端區(qū)的功能。免疫新西蘭大白兔后獲得抗原特異性的抗體，對(duì)惡性瘧紅內(nèi)期不同發(fā)育階段的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)Pfdyn僅在紅內(nèi)期的裂殖體成熟期表達(dá)。對(duì)不同流行區(qū)惡性瘧原蟲(chóng)分離株P(guān)fdyn部分內(nèi)含子及外顯子測(cè)序，結(jié)果表明外顯子編碼區(qū)高度保守，僅有部分點(diǎn)突變，內(nèi)含子有部分片斷缺失或移碼突變。 根據(jù)同源性分析提示，本文又從鼠瘧約氏瘧原蟲(chóng)的cDNA克隆到全長(zhǎng)的Pydyn基因，蛋白序列比較證明與惡性瘧原蟲(chóng)Pfdyn蛋白有75％的同源性。IFA結(jié)果表明Pydyn在紅內(nèi)期、蚊胃期及唾液腺子孢子期均有表達(dá)。網(wǎng)上數(shù)據(jù)顯示Pfdyn在配子體期也有轉(zhuǎn)錄。提示Pfdyn在瘧原蟲(chóng)生活周期的多個(gè)階段都發(fā)揮作用，在不同的種屬之間具有保守性。 通過(guò)對(duì)瘧原蟲(chóng)基因組數(shù)據(jù)分析，又找到另一個(gè)屬于動(dòng)力素家族的惡性瘧原蟲(chóng)基因，Pfdyn2，與Pfdyn蛋白有38％的同源性。利用PCR從3D7，D10基因組中獲得DNA，但在其它惡性瘧原蟲(chóng)中沒(méi)有擴(kuò)增到相應(yīng)DNA。對(duì)Pfdyn2基因分子生物學(xué)特性的研究表明它在基因組中僅有一個(gè)拷貝，但是用Northern Blotting和RT-PCR技術(shù)都沒(méi)有在惡性瘧紅內(nèi)期檢測(cè)到其mRNA。進(jìn)一步利用最新發(fā)表的cDNA microarray及質(zhì)譜分析數(shù)據(jù)，也沒(méi)有查詢到Pfdyn2在紅內(nèi)期的表達(dá)，因此判斷惡性瘧原蟲(chóng)紅內(nèi)期不存在Pfdyn2蛋白。提示它或者是假基因，或者在其它期表達(dá)，承擔(dān)其它的轉(zhuǎn)運(yùn)功能。這個(gè)結(jié)果也提示惡性瘧原蟲(chóng)Pfdyn基因在紅內(nèi)期單獨(dú)承擔(dān)著在高等生物中應(yīng)由多個(gè)動(dòng)力素家族成員分別承擔(dān)的復(fù)雜功能。
【學(xué)位單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R382
【部分圖文】：

ChemilumineseeniSEApAss盯kit購(gòu)自Bioseienees公司。三、質(zhì)粒載體質(zhì)粒pEGFP一N(I圖1)由袁建剛教授實(shí)驗(yàn)組惠贈(zèng);質(zhì)粒載體pGEM一TA載體購(gòu)自Invitrogene公司(圖2);質(zhì)粒載體peDNA3.1(+八)(圖3);質(zhì)粒載體pET3oa由本室保存(圖4);質(zhì)粒載體pSEApZ一Control購(gòu)自CLONTECH公司(圖5)。

pGEM一-Tvecotr結(jié)構(gòu)及多克隆位點(diǎn)

三、質(zhì)粒載體質(zhì)粒pEGFP一N(I圖1)由袁建剛教授實(shí)驗(yàn)組惠贈(zèng);質(zhì)粒載體pGEM一TA載體購(gòu)自Invitrogene公司(圖2);質(zhì)粒載體peDNA3.1(+八)(圖3);質(zhì)粒載體pET3oa由本室保存(圖4);質(zhì)粒載體pSEApZ一Control購(gòu)自CLONTECH公司(圖5)。
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10 徐穎;dsRNA對(duì)家蠶核多角體�。˙mNPV）復(fù)制的抑制作用的研究[D];浙江大學(xué);2004年

本文編號(hào)：2863123