瘧疾是目前地球上對人類危害最嚴重的蚊媒寄生原蟲病。全世界每年有3至5億人受到瘧原蟲感染，二百至三百余萬人死于惡性瘧疾，其中80％是五歲以下兒童。瘧原蟲是瘧疾的病原體，寄生于人體的瘧原蟲共有4種，惡性瘧原蟲是其中最致命的一種。由于惡性瘧原蟲對現(xiàn)有藥物的抗藥性不斷出現(xiàn)和蔓延，蚊媒對殺蟲劑抗藥性的產(chǎn)生等因素影響，加上迄今尚無有效的瘧疾疫苗出現(xiàn)，致使對瘧疾的控制成為世界性的大難題之一。 對瘧疾的防治是多種多樣的，可以針對不同的發(fā)育階段和傳播環(huán)節(jié)采取不同的措施。目前公認最有發(fā)展前景的策略包括：1)能夠有效抑制瘧原蟲的某一特殊生命過程的藥物；2)具有預(yù)防及治療作用的疫苗。 惡性瘧原蟲Pfdyn是本實驗篩選出的新蟲源基因，前期工作證明對瘧原蟲的生存至關(guān)重要。為了更深入地了解其功能，本文在原核系統(tǒng)中表達了Pfdyn基因的不同結(jié)構(gòu)域，著重觀察了編碼蛋白中特異性的C末端區(qū)的功能。免疫新西蘭大白兔后獲得抗原特異性的抗體，對惡性瘧紅內(nèi)期不同發(fā)育階段的表達進行檢測，發(fā)現(xiàn)Pfdyn僅在紅內(nèi)期的裂殖體成熟期表達。對不同流行區(qū)惡性瘧原蟲分離株P(guān)fdyn部分內(nèi)含子及外顯子測序，結(jié)果表明外顯子編碼區(qū)高度保守，僅有部分點突變，內(nèi)含子有部分片斷缺失或移碼突變。 根據(jù)同源性分析提示，本文又從鼠瘧約氏瘧原蟲的cDNA克隆到全長的Pydyn基因，蛋白序列比較證明與惡性瘧原蟲Pfdyn蛋白有75％的同源性。IFA結(jié)果表明Pydyn在紅內(nèi)期、蚊胃期及唾液腺子孢子期均有表達。網(wǎng)上數(shù)據(jù)顯示Pfdyn在配子體期也有轉(zhuǎn)錄。提示Pfdyn在瘧原蟲生活周期的多個階段都發(fā)揮作用，在不同的種屬之間具有保守性。 通過對瘧原蟲基因組數(shù)據(jù)分析，又找到另一個屬于動力素家族的惡性瘧原蟲基因，Pfdyn2，與Pfdyn蛋白有38％的同源性。利用PCR從3D7，D10基因組中獲得DNA，但在其它惡性瘧原蟲中沒有擴增到相應(yīng)DNA。對Pfdyn2基因分子生物學特性的研究表明它在基因組中僅有一個拷貝，但是用Northern Blotting和RT-PCR技術(shù)都沒有在惡性瘧紅內(nèi)期檢測到其mRNA。進一步利用最新發(fā)表的cDNA microarray及質(zhì)譜分析數(shù)據(jù)，也沒有查詢到Pfdyn2在紅內(nèi)期的表達，因此判斷惡性瘧原蟲紅內(nèi)期不存在Pfdyn2蛋白。提示它或者是假基因，或者在其它期表達，承擔其它的轉(zhuǎn)運功能。這個結(jié)果也提示惡性瘧原蟲Pfdyn基因在紅內(nèi)期單獨承擔著在高等生物中應(yīng)由多個動力素家族成員分別承擔的復(fù)雜功能。
【學位單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2004
【中圖分類】：R382
【部分圖文】：

ChemilumineseeniSEApAss盯kit購自Bioseienees公司。三、質(zhì)粒載體質(zhì)粒pEGFP一N(I圖1)由袁建剛教授實驗組惠贈;質(zhì)粒載體pGEM一TA載體購自Invitrogene公司(圖2);質(zhì)粒載體peDNA3.1(+八)(圖3);質(zhì)粒載體pET3oa由本室保存(圖4);質(zhì)粒載體pSEApZ一Control購自CLONTECH公司(圖5)。

pGEM一-Tvecotr結(jié)構(gòu)及多克隆位點

三、質(zhì)粒載體質(zhì)粒pEGFP一N(I圖1)由袁建剛教授實驗組惠贈;質(zhì)粒載體pGEM一TA載體購自Invitrogene公司(圖2);質(zhì)粒載體peDNA3.1(+八)(圖3);質(zhì)粒載體pET3oa由本室保存(圖4);質(zhì)粒載體pSEApZ一Control購自CLONTECH公司(圖5)。
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本文編號：2863123