發(fā)布時間：2020-10-30 12:33

　　 研究目的 嗜酸細(xì)胞性胃腸炎(Eosinophilic gastroenteritis, EG)是以胃腸道的某些部位彌漫性或局限性嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophil EOS)異常浸潤為特征的胃腸道疾病。近年來國內(nèi)外有用白三烯受體拮抗劑孟魯司特成功治療EG的臨床病例報道。本實驗通過建立卵清蛋白(Ovalbumin OVA)誘導(dǎo)的EG小鼠模型,觀察孟魯司特治療EG小鼠的療效及其作用機制,為孟魯司特治療EG提供科學(xué)的理論依據(jù)。 研究方法 50只雌性Balb/c小鼠,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,按隨機原則分為正常對照組(n=10)和OVA處理組(n=40)。第1天OVA處理組小鼠腹腔注射OVA和AL(OH)3溶液(50ug/lmg)一次以基礎(chǔ)致敏,第15天OVA處理組小鼠腹腔注射用生理鹽水配制的OVA溶液(50ug)一次達強化致敏,第20-24天給予OVA (50mg)隔日灌胃激發(fā)胃腸道過敏。正常對照組各時間點給予等劑量磷酸鹽緩沖鹽水(Phosphate buffer saline PBS)處理,制備EG小鼠模型。造模后觀察小鼠一般表現(xiàn),檢測外周血EOS、IgE含量,隨機處死小鼠10只(正常對照組2只和OVA處理組8只),觀察小鼠胃腸病理,以驗證造模成功。造模成功后,將OVA處理組再隨機分為模型組、強的松+孟魯司特組,孟魯司特組和強的松組8只／組。第26天起模型組及各藥物治療組繼續(xù)給予OVA隔日灌胃激發(fā)胃腸反應(yīng),同時藥物治療組分別給予強的松(3mg/Kg)、孟魯司特(1.5mg/Kg)灌胃,正常對照組、模型組給予相應(yīng)體積的生理鹽水連續(xù)灌胃。第40天取材,常規(guī)計數(shù)法檢測小鼠外周血EOS含量,應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)法檢測小鼠血清IgE、白三烯D4(LTD4)及小鼠空腸組織勻漿白介素-5(IL-5)、嗜酸細(xì)胞趨化因子-1(Eotaxin-1)含量。HE染色觀察小鼠胃腸粘膜組織病理學(xué)變化。免疫組化方法檢測小鼠空腸組織主要堿性蛋白(major basic protein,MBP)表達。熒光定量PCR技術(shù)測定小鼠空腸組織半胱氨酰白三烯受體-1(cysteinyl leukotriene receptors.1,CysLTRl)基因表達。 結(jié)果 1.臨床癥狀 正常對照組小鼠毛發(fā)光澤,精神良好,活動正常。OVA處理組小鼠在激發(fā)胃腸道過敏后,出現(xiàn)活動減少、精神不佳、豎毛、腹瀉癥狀。給予藥物治療2周,小鼠上述癥狀與模型組比較均有所好轉(zhuǎn),各給藥組間比較無明顯差異。 2.體重變化 造模后,OVA處理組小鼠體重明顯低于正常對照組(20.65±0.78gvs21.25±0.88g,P0.05)。給藥治療2周后,孟魯司特+強的松組、孟魯司特組、強的松組小鼠體重下降有所改善,與模型組比較有顯著差異(20.91±0.83g#、21.30±1.16g##、21.31±1.OOg##vs19.69±0.91g,#P0.05,##P0.01)。各藥物治療組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 3.外周血EOS計數(shù) 造模完成后,檢測小鼠外周血中EOS計數(shù),結(jié)果顯示OVA處理組小鼠EOS較正常對照組明顯升高[12.00±2.82(×109/L)vs6.45±1.92(×109/L)P0.01]。連續(xù)給藥治療2周后,孟魯司特+強的松組、孟魯司特組、強的松組小鼠外周血EOS含量明顯降低,與模型組比較有顯著差異[14.38±4.14(×109/L)##、16.38±2.67(×109/L)#、13.88±3.80(×109/L)##舊21.13±4.88(×109/L),#P0.05,##P0.01]。各藥物治療組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 4.胃、腸組織病理 正常對照組胃、腸粘膜結(jié)構(gòu)正常,厚薄均勻、規(guī)則、完整,未見水腫、充血及炎癥細(xì)胞浸潤,粘膜上皮腺細(xì)胞均正常,上皮細(xì)胞未見壞死、脫落。OVA處理組胃粘膜變薄、斷裂,下層充血,粘膜上皮細(xì)胞近胃腔端腺上皮脫落,有炎癥細(xì)胞浸潤。腸組織上皮細(xì)胞水腫、并見局灶性壞死、脫落,有大量炎性細(xì)胞浸潤。給藥治療2周后,各給藥組小鼠胃、腸粘膜各層結(jié)構(gòu)基本正常,僅見輕微充血及炎癥細(xì)胞浸潤,上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常。 5.空腸組織MBP的表達 正常對照組小鼠空腸MBP的表達弱(+),模型組小鼠空腸MBP表達明顯增強(+++),各給藥組空腸MBP表達均較模型組減弱(+)。 6.血清IgE含量 造模后,OVA處理組小鼠血清IgE含量較正常對照組明顯升高(249.90±28.66ng/ml vs174.24±17.09ng/ml,P0.01).藥物治療2周后,孟魯司特+強的松組、孟魯司特組、強的松組小鼠外周血LgE含量明顯降低,與模型組比較有顯著差異(220.78±21.02ng/ml..214.36±19.66ng/ml##.202.68±16.97ng/ml##vs243.17±17.48ng/ml,#P0.05,##P0.01).各藥物治療組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 7.血清LTD4含量 藥物治療2周后,模型組小鼠血清LTD4含量較正常對照組明顯升高(174.73±19.55ng/ml vs10g.38±14.90ng/ml,P0.01).孟魯司特+強的松組和孟魯司特組小鼠血清LTD4含量明顯降低,與模型組比較有顯著差異(126.39±35.93ng/ml.131.23±29.68ng/ml vs174.73±19.55ng/ml,P0.01)。而強的松組小鼠血清LTD4含量與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(159.31±45.13ng/ml vs174.73±19.55ng/ml,P0.05). 8.空腸組織CysLTRl mRNA表達 藥物治療2周后,模型組小鼠空腸組織CysLTRl mRNA表達較正常對照組明顯增高(2.21±0.22vs1.16±0.36,P0.01)。孟魯司特+強的松組和孟魯司特組CysLTRl mRNA表達明顯降低,與模型組比較有顯著差異(1.71±0.54..1.63±0.33##vs2.21±0.22,.P0.05,##P0.01).強的松組該基因表達略降低,與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(2.01±0.26vs2.21±0.22,P0.05)。各給藥治療組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 9.空腸組織勻漿IL-5含量 藥物治療2周后,模型組小鼠空腸組織勻漿IL-5含量較正常對照組明顯升高(162.59±17.93ng/g vs103.90±12.48ng/g,P0.01).孟魯司特+強的松組、孟魯司特組、強的松組小鼠空腸組織勻漿IL-5含量明顯降低,與模型組比較有顯著差(127.29±30.96ng/g##,136.20±25.50ng/g#,113.57±34.26ng/g##vs162.59±17.93ng/g,#P0.05,##P0.01).各藥物治療組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 10.空腸組織勻漿Eotaxin-1含量 藥物治療2周后,模型組小鼠空腸組織勻漿Eotaxin-1含量較正常對照組明顯升高(468.92±59.97ng/g vs291.77±50.77ng/g,P0.01).孟魯司特+強的松組和孟魯司特組小鼠空腸組織勻漿Eotaxin-1含量明顯降低,較模型組有顯著差異(364.19±75.81ng/g,394.99±30.00ng/g vs468.92±59.97ng/g,P0.01)。強的松組Eotaxin-1含量略有減低,與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(424.77±53.77ng/g vs468.92±59.97ng/g,P0.05)。但各給藥治療組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 1.應(yīng)用孟魯司特治療EG小鼠模型,可使小鼠臨床癥狀緩解,外周血EOS計數(shù)下降,胃腸組織病理損傷修復(fù),達到治療效果,且與強的松療效相似。 2. EG小鼠模型空腸組織CysLTRl mRNA表達上調(diào),血清LTD4水平增高,說明白三烯在GE的發(fā)病中起一定作用。 3.孟魯司特可通過與CysLTs競爭性結(jié)合腸組織中受體發(fā)揮其拮抗作用,還可抑制EOS.IgE及LTD4參與的炎癥反應(yīng),降低EG小鼠模型IL-5和Eotaxin-1水平,抑制因此介導(dǎo)的胃腸組織中EOS侵潤,減少EOS脫顆粒產(chǎn)生的主要堿性蛋白(MBP),起到調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)作用,是其防止EG胃腸損傷的重要機制。 總之,孟魯司特可通過抑制EOS、IgE、LTD4、IL-5及Eotaxin-1多途徑介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)而發(fā)揮治療作用,療效與強的松相當(dāng)。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R573.3;R-332
【文章目錄】：
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CATALOGUE
中文摘要
ABSTRACT
符號說明
引言
    參考文獻
實驗一 建立嗜酸細(xì)胞性胃腸炎小鼠模型
    1 實驗材料
    2 實驗方法
    3 實驗結(jié)果
    4 討論
    參考文獻
實驗二 孟魯司特治療嗜酸細(xì)胞性胃腸炎小鼠的療效觀察
    1 實驗材料
    2 實驗方法
    3 實驗結(jié)果
    4 討論
    參考文獻
實驗三 孟魯司特對嗜酸細(xì)胞性胃腸炎小鼠血清LTD4及空腸組織CysLTR1mRNA表達的影響
    1 實驗材料
    2 實驗方法
    3 實驗結(jié)果
    4 討論
    參考文獻
實驗四 孟魯司特對嗜酸細(xì)胞性胃腸炎小鼠空腸組織IL-5、Eotaxin-1的影響
    1 實驗材料
    2 實驗方法
    3 實驗結(jié)果
    4 討論
    參考文獻
結(jié)論
展望
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
學(xué)位論文評閱及答辯情況表
文獻綜述
    參考文獻
英文論文1
英文論文2

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 趙國平;石偉超;;半夏瀉心湯對EG小鼠Eotaxin-1mRNA表達的影響[J];遼寧中醫(yī)雜志;2011年11期

2 張洪泉,武玉清,周成華;孟魯司特對哮喘豚鼠氣道嗜酸粒細(xì)胞炎癥的抑制作用[J];中國藥理學(xué)通報;2004年07期

3 鐘慧;洪建國;;半胱氨酰白三烯受體拮抗劑孟魯司特的研究進展[J];中華哮喘雜志(電子版);2011年05期

本文編號：2862482