乙肝病毒大分子表面抗原的前 S1(PreS1)區(qū)在病毒顆粒的裝配和感染中起 重要作用,它存在大量的 T 和 B 細(xì)胞免疫表位,并在 PreS1(21-47)片段內(nèi)具有病 毒與肝細(xì)胞膜的結(jié)合位點(diǎn)。HBV 疫苗中引入 PreS1 序列,有可能提高目前使用 的由小分子表面抗原構(gòu)成的疫苗的反應(yīng)性,深入分析 PreS1 區(qū)的表位對新型乙肝 疫苗的設(shè)計十分重要。另外,血清抗 PreS1 抗體很可能是乙肝臨床診斷的一種新 的指標(biāo)。因此,研制高靈敏度和穩(wěn)定性的抗 PreS1 抗體檢測系統(tǒng)可能會有很好的 社會和經(jīng)濟(jì)效益。 本文首先在大腸桿菌中高效表達(dá)了 8 個在 PreS1(21-119)區(qū)域內(nèi)序列交叉重 疊,即 PreS1 (21-47)、PreS1 (34-59)、PreS1 (48-70)、PreS1 (60-85)、PreS1 (71-94)、 PreS1 (86-109)、PreS1 (95-119)和 PreS1 (21-119) 的 GST 融合蛋白。利用這些融 合蛋白,通過免疫印跡和 ELISA 等方法,研究了小鼠和人對 PreS1 區(qū)域的免疫 反應(yīng)特性,鑒定了它的 B 細(xì)胞免疫表位,并比較了不同感染類型乙肝患者血清 中針對不同 PreS1 片段的抗體活性。結(jié)果顯示,人對 PreS1 區(qū)域的免疫反應(yīng)比小 鼠復(fù)雜。小鼠的 B 細(xì)胞免疫表位存在于 PreS1(21-59)和 PreS1(95-109)片段內(nèi),而 人類則位于 PreS1(21-119)區(qū)域的絕大部分,其中保護(hù)性的表位可能位于 PreS1(21-59)和 PreS1(95-119)序列內(nèi),這與以往的研究結(jié)果是相符的。值得指出 的是,本文首次鑒別了一個主要的 B 細(xì)胞免疫表位,它具有很強(qiáng)的免疫原性, 并推測它可能是構(gòu)像性的并能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性的抗體。這些結(jié)果為深入了解 HBV 的免疫學(xué)特性和新型乙肝疫苗的設(shè)計提供了有益的信息。 為了提高抗 PreS1 抗體的檢測水平,本文在大腸桿菌中成功地表達(dá)了由柔 性肽(Gly4Ser)3連接兩個拷貝 PreS1(21-47)的 GST 融合蛋白(GST-SLS),比較了 它與人工合成 PreS1(21-47)多肽、單拷貝 PreS1(21-47)以及兩個拷貝直接相連的 PreS1(21-47)片段與 GST 的融合蛋白(GST-SI 、GST-SII)與抗 PreS1(21-47)抗 體的免疫反應(yīng)性。結(jié)果表明,GST-SLS 的免疫反應(yīng)性及穩(wěn)定性均明顯高于其他的 PreS1(21-47)融合蛋白或合成多肽,推測可能是柔性肽段增加了兩個 PreS1(21-47) 序列之間的距離和自由度,使得兩個表位充分地暴露。初步的臨床結(jié)果也顯示, GST-SLS 的靈敏性和穩(wěn)定性都比 GST-SII 有明顯的提高。因此,它具有良好的應(yīng) 2 WP=3 用開發(fā)前景。 最后,本文還用 PreS1(21-119)與 His×6 tag 的融合蛋白免疫 Balb/c 小鼠,采 用細(xì)胞融合的方法,獲得了兩株分泌抗 PreS1 單抗的雜交瘤細(xì)胞株,測定了單抗 的亞型為 IgG1。并利用上述 8 個序列重疊的 PreS1 融合蛋白,通過免疫印跡的 方法鑒定了它們的作用表位位于 PreS1(34-47)內(nèi)。這為單抗的性質(zhì)和應(yīng)用的深入 研究打下了基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R392
【文章目錄】：
引言
第一章 序列交叉重疊的 PreS1 片段融合蛋白的表達(dá)和純化
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第二章 小鼠的 PreS1 區(qū) B 細(xì)胞免疫表位鑒定
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第三章 人類的 PreS1 區(qū) B 細(xì)胞免疫表位鑒定及其保護(hù)性分析
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第四章 柔性肽連接的雙拷貝 PreS1（21-47）的融合蛋白表達(dá)及應(yīng)用
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第五章 抗 PreS1 單抗的制備及其免疫學(xué)特性研究
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄 在學(xué)期間發(fā)表的論文
致謝

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 楊劍瑩,金菁,孔玉英,衛(wèi)軍,張祖?zhèn)?李光地,汪垣,袁漢英,李育陽;畢赤酵母表達(dá)的重組乙肝表面抗原SS1的純化及性質(zhì)鑒定[J];生物化學(xué)與生物物理學(xué)報;2000年05期

2 楊海林，金怡，曹慧婷，徐諧，李光地，汪垣，張祖?zhèn)?帶preS1的乙肝表面抗原融合蛋白的親和純化[J];生物化學(xué)與生物物理學(xué)報;1996年04期

本文編號：2857155