目的：構(gòu)建大鼠尾靜脈注射模型，研究瘦素（leptin）在正常大鼠體內(nèi)對載脂蛋白M（apoM）表達(dá)及分泌的影響。 方法：健康成年SD雄性大鼠，采取尾靜脈注射方式分別泵入生理鹽水和50ng/mlleptin，泵速設(shè)為2.5ml/h，持續(xù)6hrs。分別檢測大鼠血糖、胰島素、總膽固醇（TC）、總甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平。RT-PCR方法檢測大鼠肝臟apoM、apoB、LDL-R及apoAI表達(dá)的變化，dot-blotting方法血清ApoM的變化。 結(jié)果：尾靜脈置管連續(xù)輸入50ng/ml leptin6hrs后，SD大鼠肝臟apoM mRNA水平下降55.15%（P=0.0159），apoB和LDL mRNA水平分別下降48.60%（P=0.0079）及40.43%（P=0.0159），apoAI表達(dá)增加149%（P=0.0079），而血清apoM水平則無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。尾靜脈模型中，50ng/ml leptin對處理組大鼠血清胰島素水平較對照組下降68.82%（P=0.0317），而血糖增加14.68%（P=0.0079），其他脂蛋白無明顯變化。 結(jié)論：leptin對apoM的表達(dá)調(diào)節(jié)可能首先發(fā)生在肝臟，肝臟是leptin調(diào)節(jié)apoM表達(dá)的關(guān)鍵部位。leptin在體內(nèi)對apoM的表達(dá)調(diào)節(jié)可能與低胰島素水平和高血糖水平相關(guān)。 目的：利用大鼠離體肝灌注模型及人正常細(xì)胞株LO2細(xì)胞，進(jìn)一步研究leptin在肝臟中對apoM及相關(guān)脂質(zhì)的表達(dá)調(diào)節(jié)作用。 方法：健康成年SD雄性大鼠肝臟游離后，將肝臟置于灌注裝置中。（1）leptin對離體肝臟apoM表達(dá)的影響：持續(xù)以5ml/min分別泵入培養(yǎng)液（含牛血清白蛋白30g/L）、含10ng/ml leptin培養(yǎng)液（含牛血清白蛋白30g/L）、含100ng/ml leptin培養(yǎng)液（含牛血清白蛋白30g/L），分別設(shè)立對照組，每組8個離體肝灌注模型。持續(xù)6hrs后取肝組織標(biāo)本檢測相關(guān)指標(biāo)的mRNA水平。（2）人正常細(xì)胞株LO2細(xì)胞經(jīng)不同濃度leptin（10ng/ml、100ng/ml、500ng/ml）分別孵育24hrs后，檢測apoM mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果：在離體肝灌注模型中，生理濃度leptin（10ng/ml）對apoM、apoB、LDLR表達(dá)無明顯影響（P0.05），超濃度leptin處理組（100ng/ml）能顯著上調(diào)apoM、apoB、LDLR的表達(dá)（P值分別為0.029，0.047，0.008），生理濃度leptin（10ng/ml）和超濃度leptin處理組（100ng/ml）對肝臟apoAI的表達(dá)無明顯影響（P0.05）。500ng/ml leptin均能顯著下調(diào)人正常細(xì)胞株LO2細(xì)胞apoM mRNA的表達(dá)。 結(jié)論：Leptin對肝實質(zhì)細(xì)胞apoM mRNA表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用。離體肝灌注系統(tǒng)缺乏體內(nèi)的整體調(diào)節(jié)機(jī)制，與正常體內(nèi)環(huán)境相比，leptin與胰島素之間的反饋調(diào)節(jié)信號受阻，這可能是leptin在肝灌注系統(tǒng)中對apoM的調(diào)節(jié)作用不同于體內(nèi)調(diào)節(jié)的一個原因。 目的：研究大鼠離體肝灌注模型及人正常細(xì)胞株LO2細(xì)胞中，leptin調(diào)控apoM表達(dá)的可能機(jī)制。 方法：離體肝臟灌注組分為4組（8只/組），分別為①培養(yǎng)液（含牛血清白蛋白30g/L）+0ng/ml leptin；②培養(yǎng)液（含牛血清白蛋白30g/L）+0ng/ml leptin+10μMLY294002；③培養(yǎng)液（含牛血清白蛋白30g/L）+100ng/ml leptin；④培養(yǎng)液（含牛血清白蛋白30g/L）+100ng/ml leptin+10μM LY294002。持續(xù)以5ml/min泵入上述灌注液，持續(xù)6hrs。6hrs后取肝組織標(biāo)本檢測相關(guān)指標(biāo)的mRNA水平。 人正常細(xì)胞株LO2細(xì)胞分別經(jīng)①RPMI1640培養(yǎng)液+500ng/ml leptin；②RPMI1640培養(yǎng)液+500ng/ml leptin+1μM LY294002；③RPMI1640培養(yǎng)液+500ng/mlleptin+5μM LY294002；④RPMI1640培養(yǎng)液+500ng/ml leptin+10μM LY294002孵育24hrs后，檢測apoM mRNA表達(dá)水平的變化。 結(jié)果：LO2細(xì)胞經(jīng)500ng/ml leptin及不同濃度的PI3K阻斷劑LY294002共孵育24hrs后，對apoM的表達(dá)水平無明顯改變（P0.05）。含10μM PI3K阻斷劑LY294002的RPMI1640培養(yǎng)液組灌注6hrs后，與對照組相比apoM表達(dá)水平明顯上升；超生理濃度的leptin（100ng/ml）與10μM LY294002（0μM LY294002）共灌注6hrs后，與單獨使用生理濃度的leptin（100ng/ml）灌注組相比，apoM表達(dá)水平無統(tǒng)計學(xué)差異。通過雙因素相關(guān)性分析，leptin與LY294002兩種處理因素不存在交互作用。 結(jié)論：Leptin在體外對apoM的表達(dá)調(diào)控可能不是通過PI3K途徑實現(xiàn)的。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R363
【部分圖文】：

大鼠固定（3）用50℃左右的溫水清洗和浸泡鼠尾，直至3根尾靜脈清晰顯現(xiàn)（圖2）

12圖 2 溫水浸泡鼠尾少量肝素鹽水處理的 22 號靜脈留置針穿刺尾靜脈成功后退出針芯，若穿刺靜脈血立即進(jìn)入針尾連接管，連接輸液管，確認(rèn)靜脈通道通暢后用 1 號絲線。

尾靜脈穿刺（5）兩組分別泵入生理鹽水和50ng/ml瘦素，泵速設(shè)為2.5ml/h，持續(xù)6h（圖4）
【共引文獻(xiàn)】

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1 焦國慶,張曉膺;甲基潑尼松龍對腎癌細(xì)胞株786-0載脂蛋白M的影響[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2005年03期

2 金丹;陸付耳;;PI_3-K在2型糖尿病發(fā)病機(jī)制中的作用[J];醫(yī)學(xué)綜述;2007年01期

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1 白曉蘇;2型糖尿病家系血清蛋白組學(xué)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

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1 崔旻;苦瓜多糖和蘆薈多糖的降血糖作用及其機(jī)理的研究[D];山東師范大學(xué);2003年

2 荊朝輝;2型糖尿病患者中載脂蛋白M及血脂相關(guān)性研究[D];蘇州大學(xué);2006年

3 張宇航;NEFA、Ins、HGF、IGF-1對牛肝細(xì)胞InsR活性的調(diào)控作用[D];吉林大學(xué);2007年

4 蔣波;高血糖對大鼠載脂蛋白M表達(dá)和分泌的影響[D];蘇州大學(xué);2007年

5 金丹;黃連解毒湯及黃連素對2型糖尿病大鼠靶組織中磷脂酰肌醇-3激酶mRNA和蛋白表達(dá)的影響[D];華中科技大學(xué);2006年

本文編號：2845576