銀屑病是一種常見(jiàn)的免疫相關(guān)性慢性炎癥性皮膚病，其病程長(zhǎng)，易復(fù)發(fā)，對(duì)患者身心健康影響很大。銀屑病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，是環(huán)境、遺傳等多因素參與的以皮膚慢性炎癥為表現(xiàn)的皮膚病，主要由T淋巴細(xì)胞免疫介導(dǎo)，其中CD4+T淋巴細(xì)胞免疫功能異常尤為重要。過(guò)去的研究多認(rèn)為銀屑病病程中存在Th1/Th2細(xì)胞平衡的異常。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)了一類CD4+T淋巴細(xì)胞的新亞群——Th17細(xì)胞，它能分泌IL-17、IL-22等細(xì)胞因子，在銀屑病發(fā)病過(guò)程中起了關(guān)鍵性作用。Th17細(xì)胞產(chǎn)生IL-17A、IL-17F、IL-22，以及Th1細(xì)胞產(chǎn)生INF-γ、TNF-α，這些介質(zhì)作用于角蛋白細(xì)胞，導(dǎo)致角質(zhì)形成細(xì)胞激活、增殖，并產(chǎn)生一系列細(xì)胞因子，進(jìn)一步誘導(dǎo)了T細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等向表皮遷移，形成惡性循環(huán)。由此可見(jiàn)，Th1和Th17細(xì)胞在銀屑病發(fā)病中起到了至關(guān)重要的作用。抑制Th1、Th17細(xì)胞增殖及其下游細(xì)胞因子的分泌可有效緩解銀屑病。 咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型是近幾年來(lái)應(yīng)用較廣的動(dòng)物模型，能快速誘導(dǎo)出與人類銀屑病相似的皮膚表現(xiàn)，其臨床特征、組織病理和發(fā)病分子學(xué)特征與人類銀屑病發(fā)病機(jī)制極為相似，能有效模擬人類銀屑病，并可進(jìn)一步被用于闡明銀屑病發(fā)病機(jī)制、評(píng)估新療法的療效。 消銀方是長(zhǎng)海醫(yī)院治療銀屑病的經(jīng)典組方，能有效改善、控制銀屑病病情，并且價(jià)格低廉，副作用相對(duì)較小。依巴斯汀是一種無(wú)鎮(zhèn)靜作用的H1受體拮抗劑，有研究表明依巴斯汀可以抑制T細(xì)胞增殖和分泌IL-4, IL-5, IL-6以及TNF-α等細(xì)胞因子。 本課題研究研究目標(biāo)是在成功構(gòu)建咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠模型基礎(chǔ)上，進(jìn)一步觀察消銀方和依巴斯汀作用后，小鼠模型皮損的組織學(xué)改善情況和皮損中Th1、Th17細(xì)胞下游細(xì)胞因子的變化，來(lái)探討消銀方的作用機(jī)制及依巴斯汀治療銀屑病的可能性。 第一部分咪喹莫特誘導(dǎo)銀屑病小鼠模型的建立及評(píng)價(jià) [研究目的]構(gòu)建咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型，為進(jìn)一步藥物作用機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。 [研究方法]選用BABL/c小鼠是模型動(dòng)物，取背部2cm×1.5cm區(qū)域脫毛，空白對(duì)照組背部無(wú)毛區(qū)每日涂抹蒸餾水約0.5ml，模型組背部無(wú)毛區(qū)涂以5%咪喹莫特乳膏，60mg/天，連續(xù)6天。觀察小鼠涂藥區(qū)皮膚變化情況。造模結(jié)束后，肉眼觀察小鼠背部皮膚有無(wú)紅斑、鱗屑及嚴(yán)重程度；兩組小鼠脫臼處死，取背部皮損制作石蠟切片行HE染色，觀察表皮厚度及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況。 [結(jié)果]肉眼觀察空白對(duì)照組皮膚無(wú)明顯紅斑鱗屑，模型組經(jīng)背部皮膚逐漸出現(xiàn)紅斑，并長(zhǎng)出黏著性銀白色鱗屑。HE染色鏡下觀察模型組較空白對(duì)照組表皮明顯增厚，炎細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)明顯增多。 [結(jié)論]通過(guò)5%咪喹莫特誘導(dǎo)構(gòu)建的銀屑病小鼠模型在臨床上可較好的模擬銀屑病。 第二部分消銀方、依巴斯汀等藥物治療咪喹莫特誘導(dǎo)銀屑病小鼠模型的療效評(píng)價(jià) [研究目的]研究消銀方和依巴斯汀治療咪喹莫特誘導(dǎo)銀屑病小鼠模型的療效，并進(jìn)一步驗(yàn)證小鼠模型模擬銀屑病的有效性。 [研究方法] BABLc小鼠54只，隨機(jī)分為9組（I—IX組），每組6只。背部脫毛，I組為空白對(duì)照組， II-IX組背部無(wú)毛區(qū)每日涂以5%咪喹莫特乳膏連續(xù)6天建模，建模成功后，8個(gè)模型組每?jī)商烊孕柰磕ㄟ溧厝楦嘁淮�，以保持銀屑病模型的穩(wěn)定性。給藥方案：II組為模型對(duì)照組，不給藥；III-IX組依次給予生理鹽水（0.5ml/d）、消銀方（2.88g/kg.d）、依巴斯�。�3.03mg/kg.d）、復(fù)方甘草酸苷（22.75mg/kg.d）、雷公藤多甙（9.1mg/kg.d）、地塞米松（1.02mg/kg.d）、環(huán)孢素A（27.30mg/kg.d）藥液每日灌胃治療，療程2周。治療結(jié)束后處死小鼠，取背部皮損組織，平均分為三份，其中兩份立即置于﹣80℃冰箱保存?zhèn)溆�，一份投入預(yù)先配好的固定液10%福爾馬林液中固定。治療過(guò)程中拍照記錄皮損處紅斑鱗屑變化情況。制作皮損石蠟切片行HE染色，計(jì)數(shù)各組炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)和縱向表皮面積值，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。 [結(jié)果]通過(guò)肉眼觀察，治療2周后， IV組、VI組、VIII組紅斑鱗屑較前有所好轉(zhuǎn)，其中VIII組鱗屑厚度較前明顯變少變��；II組、III組、V組、VII組、IX組紅斑鱗屑較治療前無(wú)明顯改善。 浸潤(rùn)細(xì)胞數(shù)的多重比較顯示，空白對(duì)照組低于其他各組（P均小于0.05）；模型對(duì)照組與生理鹽水組均高于其他各組（P均小于0.05）；消銀方組低于依巴斯汀組與復(fù)方甘草酸苷組（P均小于0.05），與環(huán)孢素A組、雷公藤組、地塞米松組無(wú)明顯差異；依巴斯汀組高于消銀方組（P＜0.05），與復(fù)方甘草酸苷組、環(huán)孢素A組、雷公藤組、地塞米松組無(wú)明顯差異。 縱向表皮面積值的多重比較顯示，空白對(duì)照組低于其他各組（P均小于0.05）；模型對(duì)照組與生理鹽水組均高于其他各組（P均小于0.05）；消銀方組低于復(fù)方甘草酸苷組、環(huán)孢素A組、依巴斯汀組（P均小于0.05），與地塞米松組、雷公藤組無(wú)明顯差異；依巴斯汀組與其他各組均有差異，除低于模型對(duì)照組與生理鹽水組外，均高于其他組（P＜0.05）。 [結(jié)論]咪喹莫特誘導(dǎo)銀屑病小鼠模型能有效模擬人類銀屑病，并可用于藥效學(xué)研究。消銀方和依巴斯汀治療銀屑病小鼠模型有不同程度的療效，可有效降低小鼠模型皮損中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量，抑制表皮細(xì)胞過(guò)度增殖。 第三部分消銀方、依巴斯汀等藥物治療咪喹莫特誘導(dǎo)銀屑病小鼠模型的作用機(jī)制研究 [研究目的]比較消銀方和依巴斯汀治療后，銀屑病小鼠模型皮損中TNF-α、IFN-γ、IL17、IL22等細(xì)胞因子在基因及蛋白水平上的差異，從而探索其作用機(jī)制。 [研究方法]取第二部分中凍存于-80℃冰箱的小鼠皮損組織，分別提取RNA和總蛋白，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR、Western blot分別檢測(cè)TNF-α、IFN-γ、IL17、IL22等細(xì)胞因子mRNA和蛋白表達(dá)。 [結(jié)果]空白對(duì)照組TNF-α、IFN-γ、IL17、IL22mRNA和蛋白表達(dá)均顯著低于模型對(duì)照組與生理鹽水組；消銀方治療后小鼠皮損內(nèi)四種細(xì)胞因子mRNA表達(dá)較模型對(duì)照組均明顯下降，其中IL-17mRNA表達(dá)下降最明顯；依巴斯汀治療后較模型對(duì)照組TNF-α、IFN-γ、IL-17mRNA表達(dá)明顯下降，但I(xiàn)L-22mRNA無(wú)明顯變化。TNF-α、IFN-γ、IL17、IL22蛋白表達(dá)符合mRNA表達(dá)差異。 [結(jié)論]消銀方與依巴斯汀治療能有效降低銀屑病小鼠模型皮損中細(xì)胞因子mRNA及蛋白表達(dá)，其中消銀方作用較為全面，對(duì)Th1細(xì)胞因子TNF-α、IFN-γ以及Th17細(xì)胞因子IL17、IL22均有顯著降低作用；依巴斯汀亦對(duì)Th1、Th17細(xì)胞通路均有抑制作用，但主要作用于Th1細(xì)胞通路，能顯著抑制TNF-α、IFN-γ的分泌。
【學(xué)位單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R758.63;R-332
【部分圖文】：

二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果（一）外觀肉眼評(píng)價(jià)I 組（空白對(duì)照組）皮膚無(wú)明顯紅斑鱗屑（圖 1），II 組經(jīng)外涂 5%咪喹理的背部皮膚逐漸出現(xiàn)紅斑，并長(zhǎng)出黏著性銀白色鱗屑（圖 2）。

模型組建模后皮膚逐漸變紅并長(zhǎng)出銀白色鱗屑（二）HE切片染色法觀察

HE染色（×200）
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2845230