移植物抗宿主病（GVHD）是同種異基因移植物中的免疫活性細(xì) 胞（主要為T細(xì)胞），識別宿主抗原并對宿主產(chǎn)生的病理損傷狀態(tài)。去 除或滅活移植物中的T細(xì)胞可以將重癥GVHD發(fā)生率從80％降至 30％，但是移植失敗率增加了20％，白血病的復(fù)發(fā)率提高了30％、感 染率增加30％。顯示了，移植物中的免疫活性細(xì)胞在移植后免疫和造 血重建方面具有重要作用。新的發(fā)展方向是通過調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞功能 降低移植相關(guān)并發(fā)癥和提高移植效果。 目的 通過體外訓(xùn)導(dǎo)的Ⅱ型T細(xì)胞（Th2、Tc2）移植，建立一種既降低 急性GVHD又保留移植物抗白血�。℅VL）效應(yīng)的骨髓移植模式， 并從殺傷細(xì)胞抑制性受體（KIR）/MHCⅠ識別角度探討其分子機(jī)制， 為GVHD的研究提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 1.優(yōu)勢化Ⅱ型T細(xì)胞群的制備及其鑒定：體外在mIL-4（1000u/ml）、 Ionomycin（5ug/ml）和ConA（5ug/ml）環(huán)境下，把C57BL/6~(11-26)鼠T 淋巴細(xì)胞（CD_4~+、CD_8~+）訓(xùn)導(dǎo)為可產(chǎn)生Ⅱ類細(xì)胞因子IL-4的Th2和 Tc2細(xì)胞群。分別采用夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）和流式細(xì)胞儀（FCM） 檢測該細(xì)胞群產(chǎn)生IL-4的能力。 2.優(yōu)勢化Ⅱ型T細(xì)胞表達(dá)KIR（Ly49C、Ly49A）及其功能研究： 用抗親和素－生物素－過氧化物酶復(fù)合物法（ABC）和原位分子雜交組織 化學(xué)OSHH）檢測 Ly49A和 Ly49C的表達(dá)；用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MLR） 和 MTT方法分析調(diào)節(jié) Ly49C對優(yōu)勢化的 T淋巴細(xì)胞增殖和對白血病殺 傷活性的影響。 3．建立半相合同種異體骨髓移植的急性GVHD模型：以親代 C57BL／6”Ib鼠為供者，以 BALB／c X B6，F(xiàn)；”‘“（CB6F卜為受者，預(yù)處 理?xiàng)l件為全身照射（TBI，60C。照射 9刀Gy人進(jìn)行 T淋巴細(xì)胞混合骨髓 細(xì)胞移植，建立急性GVHD模型。 4．建立半相合紅白血病模型：把可移植的 H＜遺傳背景的 EL96紅 白血病細(xì)胞靜脈接種給CB6F；付川“鼠，建立F；汁’“紅白血病模型，以觀 察GVL效應(yīng)。 5．優(yōu)勢化＊型T細(xì)胞混合骨髓細(xì)胞移植對GVHD和GVL的影響：把 體外訓(xùn)導(dǎo)的 C57BL伍卜比來源的 ThZ、To2細(xì)胞與其骨髓細(xì)胞按 10：ILb 例K 10’11型 T細(xì)胞：SX 106骨髓細(xì)胞）混合后，移植給經(jīng)過 TBI 預(yù)處理的半相合的正常和荷紅白血病CB6F；卜ZWh受鼠，以生存期、病理 學(xué)改變等指標(biāo)評價(jià)移植效果。同時(shí)，觀察 Ly49A、Ly49C在 GVHD發(fā)生 鼠表達(dá)狀態(tài)，探討KIR表達(dá)與GVHD或GVL的關(guān)系。 結(jié)果 1．在mIL葉、ConA和Ionomycin環(huán)境下體外培養(yǎng)4天即可使靜息淋 巴細(xì)胞mIL－4的分泌水平由低于20ug／ml提高到833．33土28．73u旮ml。 優(yōu)勢化＊型 T細(xì)胞膜 mIL＊表達(dá)由 6．8土 1．2％提高到 29．3士 5．4％…wt 0．of）。 2．優(yōu)勢化的＊型 T淋巴細(xì)胞的 Ly49CmRNA表達(dá)陽性率為 25．6士 6．2％（靜息T細(xì)胞＜3％卜 Ly49A的膜表達(dá)為22．5士4．9％（靜息T細(xì)胞 ＜5％卜 FCM檢測結(jié)果顯示：Ly49C在＊型 T細(xì)胞表達(dá)陽性率 29．8 ．4－ 土4．3％，其中 CD／細(xì)胞表達(dá)陽性率為 10二土0．9％、CDS”細(xì)胞陽性表達(dá) 率為 17．8土 l．3o�？� Ly49C 單克隆抗體（5E6）可以使 C57BL／6H二b．BALB／C””’‘之陽單向MLR和雙向MLR的增衍活性分別提 高ZI．5土3．4％和 13．8土1石％。5E6抗體使C57BL／6鼠＊型T細(xì)胞對 EL9611細(xì)胞的殺傷活性提高 47．2土 8．5o。 3·所建立的半相合急性GVHD模刑（C57BL舊”二‘一CB6FI”2＼具 有 100O發(fā)生 GVHD、死于 GVHD的時(shí)間集中在 17．2土 3．4天、病理表 現(xiàn)典型等。 4CB6F；H“Zdlb紅白血病模型己傳 4代，靜脈接種＊即可發(fā)病。發(fā) 病時(shí)白血病細(xì)胞主要浸潤肝、脾和骨髓。在每只鼠接種 10‘1’EL96ll 細(xì)胞間，生存時(shí)間與接種細(xì)胞數(shù)成線性負(fù)相關(guān)（，－0．972）。 5．在半相合的GVHD模型（C57BL沁“工‘－CB6FI”屯d／、中 GVHD 發(fā)生組的平均生存時(shí)間為 17刀 f 5＊ 5天，優(yōu)勢化＊型T細(xì)胞移植組 GVHD發(fā)生時(shí)間延遲、程度減低，生存時(shí)間為 50刀土門二7天（Pwto刀5）。 6．在亢全異基因移植中（C57BL／6卜2‘一BLAB兒卜Zd），未進(jìn)行移植的 白血病對照組生存期10石土1．3天、環(huán)磷酚胺治療組生存期18．7土4．2 天、11型 T細(xì)胞混合骨髓細(xì)胞移植組生存期為 36．9士 10．8人（P＜0刀5）。 在半相合異基因優(yōu)勢化11性細(xì)胞移植中（C57BL歷”－Zb、CB6Flll－Zd／b）， 未進(jìn)行移植的白血病對照組生存期為12．3士2．8大、環(huán)磷酚胺治f組生 存期為 17＊土 2石天、11型 T細(xì)胞混合骨髓細(xì)胞移植組生存期為 45刀土 27．7天（p＜0．05），其中6／10只生存大于60天。 7．GVHD發(fā)生鼠的脾 T細(xì)胞中 Ly49A陽性表達(dá)細(xì)胞占 3．4士 1．l％、 Ly49CmRNA陽性表達(dá)細(xì)胞占9．6土1石％。無GVHD發(fā)生鼠的脾T細(xì)胞 中 Ly4gA陽性表達(dá)細(xì)胞為 22．5土3．8％（p＜0．ofL Ly49CmRNA”細(xì)胞為 32．8土6．3％（prto．of）。 ·5－ 小結(jié) 1本研究所建?
【學(xué)位單位】：第一軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2000
【中圖分類】：R392.4;R733.7

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 劉希民;H-2半相合小鼠CD34～+細(xì)胞混合TK基因轉(zhuǎn)染的TK～+T細(xì)胞移植模型中治療GVHD及其GVL效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2002年

本文編號：2826550