發(fā)布時間：2020-09-24 19:25

　　 NF-κB是免疫反應(yīng)過程中調(diào)節(jié)基因表達的一個重要的轉(zhuǎn)錄因子。NF-KB不僅能被病原微生物的固有結(jié)構(gòu)、多種細胞因子和各種壓力刺激所激活,同樣,也能被淋巴受體復(fù)合物識別的抗原所激活。 成熟T細胞的完全活化依賴于T細胞受體復(fù)合物和由抗原呈遞細胞所提供的CD28共同協(xié)作來完成。TCR/CD28共刺激誘導(dǎo)經(jīng)典的NF-κB信號通路,這條通路是由IκB kinase復(fù)合物的活化來傳遞信號的。IKK復(fù)合物由兩個有催化活性的亞基IKKα、IKKβ以及一個調(diào)節(jié)亞基IKKγ所組成。IKK復(fù)合物能催化IκBα磷酸化并進行蛋白酶體依賴的降解,從而將NF-κB二聚體釋放出來,NF-κB二聚體轉(zhuǎn)移至細胞核內(nèi)結(jié)合在KB增強子元件上起始靶標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄。 在T細胞中,有三個至關(guān)重要的蛋白CARMA1(Caspase-recruitment domain membrane-associated guanylate kinase protein1)、BCL10(B-cell CLL-lymphoma10)和MALT1(Mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma translocation gene1)形成CBM信號體,這個信號體是介導(dǎo)TCR/CD28激活的早期信號向下游轉(zhuǎn)導(dǎo),從而激活NF-κB的關(guān)鍵橋梁。MALT1作為腳手架蛋白介導(dǎo)活化的CARMA1/BCL10與TRAF6相結(jié)合,通過促進TRAF6的E3泛素連接酶的活性來激活I(lǐng)KK復(fù)合物。此外,作為類半胱氨酸酶,MALT1擁有半胱氨酸酶的活性。一旦TCR通路激活,活化的MALT1能夠切割去泛素化酶A20,從而抑制A20依賴的IKKγ(?)去泛素化,促進由TCR介導(dǎo)的NF-KB的激活。MALT1也能夠切割BCL10,促進活化的T細胞進行整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的粘附。 鑒于MALT1在由TCR介導(dǎo)的NF-κB激活過程中的關(guān)鍵作用,我們以MALT1作為釣餌用生化親和純化的方法來尋找可能參與調(diào)控MALT1功能的蛋白。在眾多候選蛋白中,我們篩選出一個泛素特異蛋白酶USP2a(ubiquitin-specific protease2a),它能夠特異地與MALT]相互作用,通過介導(dǎo)TRAF6與MALT1之間的相互作用來促進TCR介導(dǎo)的NF-κB (?)勺激活。我們的研究結(jié)果顯示：首先,在Jurkat T細胞中下調(diào)USP2a的表達,抑制了由TCR介導(dǎo)的NF-κB的激活和IL-2的產(chǎn)生,而部分回復(fù)USP2a的表達量則NF-κB的激活相應(yīng)回復(fù)。第二：在T細胞中,USP2a組成性地與TRAF6相結(jié)合,但是刺激依賴性地與MALT1、CARMA1動態(tài)結(jié)合。第三,TCR活化后,下調(diào)USP2a的表達顯著地減弱了TRAF6與MALT1之間的相互用,并且¨MALT1和TRAF6的泛素化水平,尤其是K63位的泛素化水平嚴(yán)重降低。第四,在穩(wěn)定表達USP2a-RNAi的HEK293細胞中回復(fù)USP2a的表達,過量表達的TRAF6與MALT1之間的相互作用增強。通過研究我們發(fā)現(xiàn)USP2a完整的蛋白酶活性也是它作為接頭蛋白協(xié)助TRAF6被招募到MALT1所必需的。當(dāng)下調(diào)USP2a的表達時,內(nèi)源性TRAF6的SUMO化修飾水平明顯相結(jié)合,這些結(jié)果表明USP2a持續(xù)性與TRAF6相結(jié)合,通過維持TRAF6的低SUMO化水平,使之在刺激情況下更易與MALT1(?)相互作用。我們的研究揭示了,USP2a在TCR信號通路中的發(fā)揮著正調(diào)控作用,為去泛素化酶參與去SUMO修飾過程提供了一個例子。該項研究增加了對泛素化修飾與SUMO化修飾之間聯(lián)系的了解。
【學(xué)位單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R392

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8 張文;張p

本文編號：2826161