發(fā)布時間：2020-09-14 15:26

　　 一、BCL10同Pellino2的相互作用參與介導TLR4通路 先天免疫又稱固有免疫或天然免疫,是機體防御病原體的第一道防線。在先天免疫系統(tǒng)中,不同吞噬細胞如嗜中性粒細胞和樹突細胞等通過來自Toll樣受體(TLR)的信號而辨別出病原體及“自己”。在啟動先天免疫對抗病原體的過程中最重要的一步就是識別,由殺傷細胞的受體識別存在于病原體而不存在于細胞中的成分,稱為病原體相關分子模式(pathogen-associated molecular pattern,PAMP)。不同的TLR識別的PAMP不同,例如TLR4可以識別革蘭氏陰性菌的LPS。在這里,我們證明T細胞和IκB激酶復合體間的重要信號分子BCL10與先天免疫系統(tǒng)有關,并參與了TLR4途徑及核因子κB(NF-κB)的激活。在受到微生物脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)的刺激后,BCL10被招募到TLR4信號復合物上并與Pellino2結(jié)合。 Pellino蛋白在TLR信號亞通路的建立和維持中發(fā)揮著重要的作用。Pellino2是一個新的信號傳導分子。近期研究表明外源鼠pellino2反意(antisense)重組表達能抑制LPS誘導的NF-κB的活化。為找到BCL10相關的信號轉(zhuǎn)導途徑的成員,我們用T7 Select噬菌體展示技術分別從肺及肝癌cDNA文庫中篩選到6個陽性克隆,其序列編碼人的Pellino2 cDNA的部分片段。在LPS刺激的巨噬細胞中,BCL10同Pellino2的體內(nèi)相互作用通過免疫共沉淀技術得到證明,同時,我們發(fā)現(xiàn)Pellino2蛋白的169～233氨基酸區(qū)參與介導與BCL10相互作用。為進一步研究Pellino2在BCL10依賴的信號轉(zhuǎn)導途徑中的作用,我們通過siRNA重組質(zhì)粒pSUPER-Pellino2構建了Pellino2表達沉默的細胞系。在該細胞系中,我們發(fā)現(xiàn)LPS誘導或BCL10過表達所引
【學位單位】：武漢大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2004
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

圖1.1CBL10與其相關蛋白的結(jié)構比較(Thome:BCL10)1.2BCL10的功能1.2.1BCLIO能誘發(fā)細胞凋亡與濾泡B細胞非何杰金氏淋巴瘤中belZ基因轉(zhuǎn)位t(14;18)(q32;q31)相并且通過對E10功能的預測〔Hofmnanetal.，1997」，本以為BCL10蛋白的功抑制細胞凋亡，但當其轉(zhuǎn)染293細胞時卻誘發(fā)細胞凋亡，在其他細胞系CO--S7和中，BCLIO也能誘發(fā)細胞凋亡。野生型BCL10過量表達時能誘發(fā)細胞凋亡，其C端截短突變體喪失凋亡誘力，但能激活NF一KB，而CARD截短突變體則喪失凋亡誘發(fā)和激活NF一B的能進一步探測BCL10突變體的功能。利用RT一PCR和克隆PCR產(chǎn)物的DNA測序分析，S1個克隆中，兩個是正常的，其他16個在BCLIO的編碼區(qū)發(fā)生突變，大部分于胸腺噴陡T的插入而產(chǎn)生的截短突變，主要是兩種BCLIO截短突變MIO6和M，

圖1.4pG/BCL10和pATCZ一AD的共轉(zhuǎn)化菌落〔Chengetal.，2003〕圖1.5pG/BCllo轉(zhuǎn)化菌落在缺陷性培養(yǎng)基SD產(chǎn)TPr一His上的生長及p一半乳糖昔酶活力測定〔Chengetal.，2003〕雖然他們初步證明了bc刀O基因產(chǎn)物可以激活報道基因的表達，但酵母其他因素產(chǎn)生的本底，也未排除條件差異產(chǎn)生的假象。為了確證BCL個轉(zhuǎn)錄激活因子的可能性，他們又采用了不同的培養(yǎng)基和不同的重組質(zhì)的轉(zhuǎn)錄激活效應進行進一步的檢驗。為了排除lue基因表達對報到基因的激活作用，除三缺(DS產(chǎn)Trp一Le。一HIS)，還用了僅缺TPr的培養(yǎng)基(sD產(chǎn)Trp)和酵母的YPD，因為與二缺平板的結(jié)果相同，所以結(jié)果未顯示。同時以質(zhì)粒SH140作為陰性和陽性對照進行月一半乳糖普酶活力測定，實驗結(jié)果見圖1.6。圖含有陰性(SH1406)和陽性(pCL2)質(zhì)粒的酵母菌株在二種酵母菌中均結(jié)果，只要含有b打/O基因的質(zhì)粒，不管是單獨存在，還是與pACTZ一AD活道因lacz的表達。母，GAL4是UAS(U

圖1.4pG/BCL10和pATCZ一AD的共轉(zhuǎn)化菌落〔Chengetal.，2003〕圖1.5pG/BCllo轉(zhuǎn)化菌落在缺陷性培養(yǎng)基SD產(chǎn)TPr一His上的生長及p一半乳糖昔酶活力測定〔Chengetal.，2003〕雖然他們初步證明了bc刀O基因產(chǎn)物可以激活報道基因的表達，但酵母其他因素產(chǎn)生的本底，也未排除條件差異產(chǎn)生的假象。為了確證BCL個轉(zhuǎn)錄激活因子的可能性，他們又采用了不同的培養(yǎng)基和不同的重組質(zhì)的轉(zhuǎn)錄激活效應進行進一步的檢驗。為了排除lue基因表達對報到基因的激活作用，除三缺(DS產(chǎn)Trp一Le。一HIS)，還用了僅缺TPr的培養(yǎng)基(sD產(chǎn)Trp)和酵母的YPD，因為與二缺平板的結(jié)果相同，所以結(jié)果未顯示。同時以質(zhì)粒SH140作為陰性和陽性對照進行月一半乳糖普酶活力測定，實驗結(jié)果見圖1.6。圖含有陰性(SH1406)和陽性(pCL2)質(zhì)粒的酵母菌株在二種酵母菌中均結(jié)果，只要含有b打/O基因的質(zhì)粒，不管是單獨存在，還是與pACTZ一AD活道因lacz的表達。母，GAL4是UAS(U

【引證文獻】

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1 孫柏;雞Bcl10基因的克隆與表達[D];西北農(nóng)林科技大學;2010年

本文編號：2818338