天然自身抗體（natural autoantibody,NAA）的研究表明，人體免疫系統(tǒng)中天然 存在著一個(gè)龐大而復(fù)雜的自身抗體網(wǎng)絡(luò)。包括AK auto Ab在內(nèi)，迄今已經(jīng)發(fā) 現(xiàn)并證實(shí)的NAA有數(shù)百種，如抗MHC、RBC、DNA、轉(zhuǎn)鐵蛋白、脂類和多 糖的抗體以及Jerne免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中的抗獨(dú)特型抗體（anti-idiotype antibody）等。 NAA在體內(nèi)存在的意義目前尚未完全闡明，但國內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)逐漸摒棄了過 去把自身抗體一律當(dāng)成“可怕的自身毒素”的看法，認(rèn)識(shí)到NAA是機(jī)體正常 免疫調(diào)節(jié)機(jī)制中重要的也是不可缺少的組成部分，積極參與了免疫系統(tǒng)自身穩(wěn) 定的調(diào)節(jié)。 天然抗角蛋白自身抗體（anti-keratin autoantibody,AK auto Ab），NAA家族成員 之一，其作用對(duì)象是表皮角質(zhì)形成細(xì)胞（keratinocyte，KC）內(nèi)的張力纖維細(xì)絲。 因此，AK auto Ab在皮膚病中的生理及病理意義引起許多皮膚科學(xué)者的關(guān) 注，并進(jìn)行了較為全面的研究。Krogh于1970年最初發(fā)現(xiàn)AK auto Ab，在80 年代末及90年代初，國際上許多學(xué)者圍繞AK auto Ab做了大量工作，如 Iwatsuki等發(fā)現(xiàn)未經(jīng)任何免疫處理的小鼠脾細(xì)胞可自發(fā)地產(chǎn)生AK auto Ab、 Hintner的體外實(shí)驗(yàn)間接地發(fā)現(xiàn)AK auto Ab可以促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞對(duì)角蛋白凝 集物的吞噬。但由于未能得到純化的AK auto Ab，使該領(lǐng)域的研究一度進(jìn)展 不大。我們?cè)捎糜H和層析的方法成功地自正常人血清中純化了AK auto Ab，并進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，AK auto Ab能夠抑制培養(yǎng)KC的增殖代謝，可以抑制KC 產(chǎn)生免疫介質(zhì)如IL-6、IL-8，促進(jìn)KC凋亡。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)還表明，AK auto Ab可 以加快皮炎的康復(fù)，促進(jìn)銀屑病樣皮損的消退，顯示了其良好的應(yīng)用前景。 但是，純化的AK auto Ab在臨床上的應(yīng)用由于其來源于人的血液而受到 第四軍醫(yī)大學(xué)俗士學(xué)位論不 三 諸多限制，而且，由于角蛋白是分子量在48～68KD之間的一組分子，我們自 正常人血清中所提取純化的 AK an。Ah也是針對(duì)這一組分子量不同的角蛋白 的多克隆抗體，這就使研究中的 AK ant。Ah作用特異性較差，無法明確 AK auoAb的作用究竟是源于針對(duì)某一特定角蛋白抗體的單獨(dú)作用，還是多種抗 角蛋白抗體的綜合作用。因此，既往所觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果至少應(yīng)該是針對(duì)多種 分子量角蛋白的綜合作用，尚無法反映針對(duì)不同分子量角蛋白的單克隆AK auo Ah的作用。 目前 AK auo Ah的研究正面臨兩大問題：①臨床應(yīng)用：研制具有良好療 效、能批量生產(chǎn)且無毒副作用的產(chǎn)品，因此研發(fā)有效的抗角蛋白的基因工程抗 體已是勢在必行；②作用機(jī)理：在分子水平上闡明 AK an。Ah生物學(xué)作用的 細(xì)胞與分子機(jī)理，特別是 AK an。Ah發(fā)揮作用的信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制，后者是全面 闡明 AK auo Ah生物學(xué)作用的基礎(chǔ)。分子機(jī)理的研究是臨床應(yīng)用的基礎(chǔ)，而 臨床應(yīng)用又是闡明機(jī)理的目的。尋找更為有效和準(zhǔn)確的研究方法及手段來盡快 解塊這些問題己迫在眉睫。 我們進(jìn)行本研究的目的就在于觀察抗角蛋白基因工程抗體Fab片段的生物 學(xué)效應(yīng)、制備抗角蛋白基因工程單鏈抗體及探討抗不同分子量角蛋白的抗體生 物學(xué)作用的、可能的信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制，為今后的深入研究奠定基礎(chǔ)。 主要實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及結(jié)果： 第一部分人源性抗角蛋白單鏈抗體的克隆、表達(dá)及活性測定 1．利用基因重組技術(shù)對(duì)從半合成噬菌體抗體庫中克隆的人源性抗角蛋白抗 體Fab片段進(jìn)行了改造，獲得了人源性抗角蛋白ScFv片段。DNA序列分析結(jié) 果表明，pSCFV的 V K和 VH基因序列同 RRKZ的 V K和 VH基因序列完全相 同，表明在Fab片段改建成ScFv過程中未發(fā)生基因突變。用ELISA的方法測 定可溶性表達(dá)的SCFV抗體與角蛋白以及鐵蛋白、胃蛋白酶、HBSAg等無關(guān)抗 原的結(jié)合反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)S。FV能特異性地與角蛋白結(jié)合而與其它抗原不結(jié)合，說 明人源性抗角蛋白Fab抗體改建為SCFV后具有較好的特異性和親和力，但可 溶性表達(dá)的ScFv的親和力低于可溶性Fab片段； 2．將利用噬菌體抗體庫技術(shù)從半合成噬菌體抗體庫中克隆到的人源性抗角 蛋白抗體Fab片段成功地進(jìn)行了可溶性表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)金屬鰲合層析純化 后，并采用 ELISA和 Western blot等方法進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明，可溶性表達(dá)的 Fab片段不僅具有良好的抗原結(jié)合活性，而且，具有相當(dāng)高的特異性，僅識(shí)別 48KD的角蛋白，與其它分子量的角蛋白或鐵蛋白、胃蛋白酶、HBSAg等無關(guān) 抗原無交叉反應(yīng)； ．2－ 第四草醫(yī)大學(xué)俗士學(xué)位論文Z
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2001
【中圖分類】：R392-33;R750.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王剛,劉玉峰;抗角蛋白自身抗體研究現(xiàn)狀與展望[J];中國皮膚性病學(xué)雜志;2000年01期

2 李承新,劉玉峰,王剛,李春英,萬業(yè)宏,李巍;人源性抗角蛋白單鏈抗體的構(gòu)建及表達(dá)[J];中華皮膚科雜志;2003年04期

3 安峰,陳玉川,陸慧琦,韓煥興;生物工程技術(shù)制備人源抗-HBs Fab片段[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2003年01期

4 于長明,宋宏斌,劉國奇,杜桂鑫,徐志凱,王海濤;可溶性抗HAV抗體Fab片段的原核表達(dá)[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年07期

5 李軍智,甄永蘇;單抗Fab片段與抗癌抗生素C1027偶聯(lián)物對(duì)肝癌細(xì)胞的作用[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1991年03期

6 夏汝山,王剛,樊建勇,李巍,劉玉峰;抗人角蛋白全I(xiàn)gG基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2004年06期

7 王琳,劉玉峰,閻巖;抗角蛋白mAb AK37輕重鏈可變區(qū)基因的克隆及序列分析[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2000年01期

8 李軍智;江敏;薛玉川;甄永蘇;;單抗Fab片段與抗癌抗生素C1027偶聯(lián)物對(duì)裸鼠移植人肝癌的治療作用[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理;1992年04期

9 林琳,魯馳,朱明潔,胡晶瑩,趙新泰;抗人小細(xì)胞肺癌單抗2F7人-鼠嵌合Fab片段基因的構(gòu)建和表達(dá)[J];中國免疫學(xué)雜志;2003年03期

10 夏汝山,喬媛媛,王剛,陳宇萍,沈柱,王琰,劉玉峰;從噬菌體抗體庫中篩選抗角蛋白單鏈抗體[J];免疫學(xué)雜志;2004年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前9條

1 尤長宣;羅榮城;丁雪梅;韓煥興;胡棟平;;抗體庫技術(shù)制備人源抗HBsAg抗體Fab片段[A];第七屆全國腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2001年

2 王剛;王琰;化冰;劉玉峰;;基因工程抗角蛋白人抗體的制備與鑒定[A];2001年中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

3 萬業(yè)宏;李承新;劉玉峰;夏汝山;黨育平;武彩霞;;抗角蛋白16單克隆抗體對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖活性的影響[A];2001年中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

4 盧寧;王剛;劉玉峰;李巍;張海龍;趙小東;夏汝山;;基因工程抗角蛋白抗體在正常皮膚和幾種表皮增生性皮膚病皮損中的反應(yīng)定位[A];2003中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2003年

5 李承新;劉玉峰;李春英;萬業(yè)宏;王剛;;基因工程技術(shù)制備人源性抗48kD角蛋白抗體Fab片段[A];2001年中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

6 王剛;劉玉峰;王琰;;從人天然抗體庫中克隆IgM抗角蛋白抗體[A];2002中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

7 劉順愛;淺野龍?zhí)?熊谷泉;工藤俊雄;徐道振;;人源抗HBsAg scFv與重組復(fù)合干擾素融合蛋白的制備及研究[A];中國免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

8 張亮;劉玉峰;楊喬欣;任君萍;黎志東;;應(yīng)用噬菌體肽庫研究銀屑病相關(guān)的角蛋白模擬表位[A];2002中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

9 李靜;伍津津;魯元?jiǎng)?賀萍;楊宏珍;朱堂友;李文維;;移植家兔后組織工程皮膚生長分化的初步研究[A];2003中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2003年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條

1 張文馨;類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的防治[N];中國消費(fèi)者報(bào);2001年

2 本報(bào)特約記者　王坤　本報(bào)記者　周奔;用好作風(fēng)帶出好隊(duì)伍[N];解放軍報(bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 李承新;人源性抗角蛋白單鏈抗體的構(gòu)建、表達(dá)和Fab片段生物學(xué)作用及其分子機(jī)理的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

2 李振莉;非免疫性人抗體Fab片段噬菌體文庫的構(gòu)建[D];天津醫(yī)科大學(xué);2004年

3 夏汝山;基因工程抗角蛋白抗體全長人IgG在CHO（dhfr～-）細(xì)胞的表達(dá)[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

4 劉金也;隱孢子蟲特異性人源抗體Fab片段的制備和研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

5 樊建勇;人源性抗角蛋白抗體的高效表達(dá)及其作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

6 武彩霞;抗角蛋白抗體對(duì)培養(yǎng)上皮細(xì)胞反應(yīng)部位功能及相關(guān)機(jī)制研究[D];中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué);2003年

7 李巍;天然抗角蛋白自身抗體轉(zhuǎn)基因小鼠的建立及相關(guān)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

8 宋宏彬;人源抗HBsAg抗體Fab段及dsFv基因的克隆和表達(dá)[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1999年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前9條

1 付萌;抗角蛋白自身抗體對(duì)鱗癌細(xì)胞端粒酶活性的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

2 黨育平;人類天然抗角蛋白自身抗體反應(yīng)模式的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

3 萬佳藝;人源天然Fab噬菌體抗體庫的構(gòu)建及抗c-Met抗體的篩選、鑒定[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

4 王乃東;鼠源性抗雄性特異性抗原噬菌體Fab抗體庫的構(gòu)建與初步篩選[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

5 萬業(yè)宏;抗角蛋白16單克隆抗體對(duì)惡性角質(zhì)形成細(xì)胞增殖活性的影響及其作用的分子機(jī)制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2000年

6 葛彥;抗人CD154人—鼠嵌合抗體Fab片段的制備及其結(jié)合活性的研究[D];蘇州大學(xué);2004年

7 盧寧;基因工程人抗角蛋白抗體在人體組織和細(xì)胞內(nèi)的反應(yīng)定位及作用研究[D];中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué);2003年

8 陳永鋒;人源性噬菌體抗體庫中抗CEA抗體的篩選與初步鑒定[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2002年

9 張維維;乙酰膽堿酯酶抗獨(dú)特型抗體的酶活性研究[D];青島大學(xué);2004年

本文編號(hào)：2816601