【摘要】： 中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞移植在臨床研究上已經(jīng)獲得一定的療效，但因為供體來源有限，難以在臨床上大范圍地開展。目前解決該問題有三個方法：(1)利用自體神經(jīng)細(xì)胞(如神經(jīng)干細(xì)胞)體外培養(yǎng)擴增后再移植到中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)，可以克服異體移植的免疫排斥。但中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞位置深在，獲取細(xì)胞必然對組織造成損傷，體外培養(yǎng)擴增也有一定的技術(shù)困難。(2)取流產(chǎn)胚胎的腦組織，分離神經(jīng)干細(xì)胞，在體外大量培養(yǎng)擴增后移植到中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)，但這樣必然面臨著倫理學(xué)的問題而無法回避。(3)取異種胚胎神經(jīng)細(xì)胞(如豬和鼠)培養(yǎng)后移植。但該方法可能會出現(xiàn)安全性和免疫排斥，例如可能會將豬的病毒傳染給人等。另外，人們對異種移植的心理接受能力也是個問題。由于細(xì)胞移植的供體來源存在著上述缺陷，人們必然要尋找更合適的供體來源。 神經(jīng)干細(xì)胞是近年來神經(jīng)生物學(xué)研究的熱點，它有可能成為腦移植的細(xì)胞來源。神經(jīng)干細(xì)胞移植治療帕金森和腦短暫缺血的動物模型已經(jīng)獲得了初步的效果，靈長類動物的脊髓損傷后移植人類的神經(jīng)干細(xì)胞，動物的肢體運動癥狀有明顯的改善。我們成功培養(yǎng)出人類胚胎來源的神經(jīng)干細(xì)胞，這種細(xì)胞表達(dá)巢蛋白和波形蛋白，細(xì)胞可以分化為神經(jīng)元、星型膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞，懸浮培養(yǎng)的神經(jīng)球中有髓鞘的形成。細(xì)胞移植到胚胎發(fā)育期的大鼠腦室內(nèi)可以整合到宿主的腦組織中，移植細(xì)胞廣泛分布于大腦半球和小腦，腦內(nèi)發(fā)育期的環(huán)境可以指引異種神經(jīng)細(xì)胞向一定的方向遷徙，說明動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)在發(fā)育階段的保守性。 人體的其他組織如骨髓、皮膚和脂肪組織容易獲取，如果在體外將這些來源的細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞，再移植到體內(nèi)，將為臨床移植的大規(guī)模開展提供極大的便利，可避免異體、異種移植引起的排斥反應(yīng)及應(yīng)用人的胚胎而致的倫理學(xué)問題。骨髓中除了造血干細(xì)胞以外還有其它的干細(xì)胞，但只有最近幾年才證明這種細(xì)胞在一定的條件下可分化為成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和肌母細(xì)胞。這種細(xì)胞又稱為克隆形成單位成纖維細(xì)胞(colony-forming-unit fibroblast)，間充質(zhì)干細(xì)胞或骨髓基質(zhì)細(xì)胞(meserichymal stem Cell，bone marrow stromal cells，BMSCs)，我們稱之為骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)。近年來的研究表明，骨髓基質(zhì)細(xì)胞在體內(nèi)和體外可以分化為神經(jīng)元。我們采用獨特的誘導(dǎo)方法將BMSCs誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，分化的細(xì)胞早期表達(dá)巢蛋白、Musashil和NSE，分化的末期表達(dá)NF-M，證明了丹參對BMSCs的分化作用。BMSCs移植到成年大鼠腦內(nèi)，細(xì)胞可以移行一段距離，移植局部無明顯的細(xì)胞增生和炎性細(xì)胞浸潤，宿主腦組織無破壞，移植細(xì)胞有很好的相容性。這些實驗均表明：BMSCs能夠轉(zhuǎn)化為神經(jīng)細(xì)胞，可以作為神經(jīng)移植的潛在的細(xì)胞 神經(jīng)移植種子細(xì)胞的培養(yǎng)和移植研究 中文摘要 來源。但是，獲取BMSCS 必須要對病人進(jìn)行骨髓穿刺，這必然會給病人 造成生理和心理上的痛苦。因此，獲取新的細(xì)胞來源勢在必行。 由脂肪組織中分離的基質(zhì)細(xì)胞（adiPose tissue－derived stromal cells，ADSCS）和 BMSCs相比有許多相似之處：（1）它們 均來源干中胚層； （2）ADSCS和 BMSCS一樣，在一定條件下也可以誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞、 軟骨細(xì)胞、肌細(xì)胞和脂肪細(xì)胞；（3）在體外培養(yǎng)條件下，兩者的形態(tài)、 生長速度和細(xì)胞表面表達(dá)的標(biāo)志物非常相似。因此，有理由相信：ADSCS 可能和BMSCS 一樣，在體內(nèi)和體外均可以轉(zhuǎn)化為神經(jīng)細(xì)胞。另外，ADSCS 具有以下幾個優(yōu)點：（l）容易獲得，對病人造成的痛苦小；（2）體外培養(yǎng) 增殖速度快，不需轉(zhuǎn)人外源基因使之永生化；（3）取病人自身的 ADSCS 培養(yǎng)，避免了異體免疫排斥和種族障礙；（4）誘導(dǎo)分化過程簡單，容易 操作。我們的前期工作己經(jīng)證實了這一點。 我們己經(jīng)成功的分離、培養(yǎng)出了大鼠和人的ADSCS。在體外實驗中，加入誘導(dǎo)物質(zhì) 后，ADSCS可以分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，表達(dá)NSE和NF－M。將ADSCS移植入正常大鼠 腦內(nèi)，ADSCS不僅存活，沒有破壞宿主的組織結(jié)構(gòu)，而且能夠移行較遠(yuǎn)距離。是否 在體內(nèi)分化為神經(jīng)元，尚待進(jìn)一步研究。在此研究基礎(chǔ)上，我們計劃進(jìn)一步優(yōu)化ADSCS 分化為神經(jīng)細(xì)胞的條件；檢測分化的神經(jīng)細(xì)胞是否具有功能；移植ADSCS至動物疾 病模型（如腦梗塞、癲癰、帕金森病等），獲取人的ADSCS向腦內(nèi)移植的安全性和 有效性的資料。 皮膚組織也較容易獲得，最近的國外有研究表明皮膚來源的干細(xì)胞可以分化為 神經(jīng)細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和脂肪細(xì)胞。我們從小鼠的皮膚組織中培養(yǎng)出這種細(xì)胞，經(jīng) 3～4次傳代后，細(xì)胞的形態(tài)較為一致，約40％的細(xì)胞表達(dá)巢蛋白，貼壁終末分化后 約有5％的細(xì)胞表達(dá)N卜M，呈現(xiàn)神經(jīng)元的形態(tài)；4～5％的細(xì)胞表達(dá)GFAP，2～3％的細(xì) 胞表達(dá)CNPase，提示有星型膠質(zhì)細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R329.2

【引證文獻(xiàn)】

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1 朱遂強;唐洲平;;腦血管疾病神經(jīng)干細(xì)胞生物學(xué)治療前景[A];湖北省暨武漢市病理生理學(xué)會第十二屆學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2004年

本文編號：2806100