發(fā)布時間：2020-08-26 04:59

【摘要】：目的：本項(xiàng)研究通過誘導(dǎo)建立口腔黏膜白斑惡變動物模型和細(xì)胞模型，為深入研究口腔黏膜白斑惡變的分子機(jī)制，實(shí)現(xiàn)口腔黏膜白斑惡變發(fā)生的早期預(yù)警、診斷及探尋有效阻斷治療靶點(diǎn)提供重要科學(xué)研究基礎(chǔ)。 方法：本項(xiàng)研究中動物模型的建立是采用0.5%苯并芘（Benzo(a)pyrene，BaP）/二甲基苯并蒽（7,12-dimethyl-benz[a]anthracene，DMBA）混合誘變劑溶解于丙酮和液體石蠟混合液中，于每周一、三、五固定時間涂擦于五周齡金黃地鼠左側(cè)頰囊黏膜，分別于涂藥第5周、9周、12周、15周分批處死地鼠，取地鼠左側(cè)涂藥部位頰囊黏膜或腫瘤組織，切取其中一部分采用10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋切片，做組織病理學(xué)診斷；其余部分立即置液氮中迅速冷卻后轉(zhuǎn)放于-80℃冰箱保存。陰性對照組則僅以溶劑丙酮和液體石蠟混合液涂擦地鼠頰囊，空白對照組不做任何處理，均于第15周處死后取地鼠頰囊黏膜。 本項(xiàng)研究中細(xì)胞模型的誘導(dǎo)建立是以口腔黏膜白斑細(xì)胞（dysplastic oralkeratinocyte，DOK）為誘變對象，分別采用單一誘導(dǎo)劑BaP，DMBA,以及聯(lián)合誘導(dǎo)劑BaP/DMBA，間斷加藥誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的DOK細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。采用倒置相差顯微鏡觀察誘導(dǎo)過程中細(xì)胞的形態(tài)變化，分別采用MTS法、軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞誘導(dǎo)前后增殖速度、克隆形成率、細(xì)胞成瘤性的變化。 結(jié)果： 1．以BaP/DMBA聯(lián)合誘變劑涂擦金黃地鼠頰囊黏膜，經(jīng)組織病理學(xué)診斷，頰囊黏膜經(jīng)歷炎癥期、輕中度異常增生期、重度異常增生期（原位癌）、浸潤癌過程。在誘變過程中地鼠黏膜組織多有白斑病變出現(xiàn)。陰性對照組和空白對照組頰囊黏膜均為正常黏膜的組織學(xué)表現(xiàn)。 2．DOK細(xì)胞經(jīng)單一誘導(dǎo)劑BaP，DMBA,以及聯(lián)合誘導(dǎo)劑BaP/DMBA間隔加藥誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)由較為一致的立方形呈現(xiàn)不規(guī)則變化，體積變小；細(xì)胞生長速度明顯加快（P＜0.05）；軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Bap組，DMBA組,以及聯(lián)合誘導(dǎo)劑BaP/DMBA組在軟瓊脂平板上均形成集落，DOK細(xì)胞無集落形成；裸鼠成瘤試驗(yàn)結(jié)果顯示Bap組，DMBA組,以及聯(lián)合誘導(dǎo)劑BaP/DMBA組細(xì)胞種植于裸鼠皮下30天后成瘤，腫瘤呈結(jié)節(jié)性迅速生長，部分見表面破潰出血，DOK細(xì)胞種植后未見成瘤。 結(jié)論： 1．采用BaP/DMBA聯(lián)合誘導(dǎo)金黃地鼠頰囊黏膜成功建立口腔黏膜白斑惡變動物模型。 2．采用單一誘導(dǎo)劑Bap，DMBA以及聯(lián)合誘導(dǎo)劑BaP/DMBA誘導(dǎo)DOK細(xì)胞成功建立口腔黏膜白斑惡變細(xì)胞模型。 目的：進(jìn)行大學(xué)生復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的流行病學(xué)調(diào)查，為復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的防治提供科學(xué)依據(jù)。 方法：大連理工大學(xué)部分學(xué)生共570例，其中男性457例，女性113例，采用問卷調(diào)查的方法詳細(xì)記錄受檢者性別、年齡、城鄉(xiāng)生源、口腔潰瘍的發(fā)作部位和大小等情況。將所得資料分別以性別、年齡、城鄉(xiāng)生源、潰瘍部位作為分組條件進(jìn)行統(tǒng)計分析，并比較各組差異。 結(jié)果： 1.復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的患病率為63.16%。 2.以性別作為分組條件，比較男女之間復(fù)發(fā)性口腔潰瘍患病率差異，結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；比較男女之間重型口瘡和輕型口瘡的構(gòu)成比差異，結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。 3.以城鄉(xiāng)生源作為分組條件，比較城鄉(xiāng)之間復(fù)發(fā)性口腔潰瘍患病率差異，結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；比較城鄉(xiāng)之間重型口瘡和輕型口瘡的構(gòu)成比差異，結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。 4.以年齡作為分組條件，比較18-20歲組、21-23歲組和24歲以上組三個年齡組間復(fù)發(fā)性口腔潰瘍患病率，結(jié)構(gòu)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；比較三組間重型口瘡和輕型口瘡的構(gòu)成比差異，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。進(jìn)一步兩兩比較，發(fā)現(xiàn)24歲以上組重型口瘡和輕型口瘡的構(gòu)成比與其他兩個年齡組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；18-20歲組和21-23歲組重型口瘡和輕型口瘡的構(gòu)成比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。 5.復(fù)發(fā)性口腔潰瘍多發(fā)生在唇、頰黏膜、唇溝和舌四個部位，不同發(fā)病部位之間輕型口瘡和重型口瘡的構(gòu)成比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；進(jìn)一步兩兩比較，發(fā)生在唇的重型口瘡和輕型口瘡的構(gòu)成比與分別與發(fā)生在唇溝和舌的構(gòu)成比進(jìn)行比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；發(fā)生在唇與頰黏膜的重型口瘡和輕型口瘡的構(gòu)成比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；發(fā)生在頰的重型口瘡和輕型口瘡的構(gòu)成比分別與發(fā)生在唇溝和舌的構(gòu)成比進(jìn)行比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；發(fā)生在唇溝的重型口瘡和輕型口瘡的構(gòu)成比與舌的構(gòu)成比進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），重型口瘡在上述四個部位的發(fā)生率由高到低為舌＞唇＝頰黏膜＞唇溝。 結(jié)論： 1.復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的患病率為63.16%。 2.復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的患病率和構(gòu)成比均與性別和城鄉(xiāng)生源無關(guān)。 3.復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的患病率與年齡無關(guān)，復(fù)發(fā)性口腔潰瘍中重型口瘡和輕型口瘡的構(gòu)成比與年齡有關(guān)，24歲以上組重型口瘡的發(fā)生率高于其他兩個低年齡組。 4.復(fù)發(fā)性口腔潰瘍多發(fā)生在唇、唇溝、頰黏膜和舌四個部位，重型口瘡的發(fā)生率由高到低為舌＞唇＝頰黏膜＞唇溝。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R-332;R781.5
【圖文】：

圖 1 空白對照組黏膜大體照片 圖 2 陰性對照組黏膜大體照片注：1 為第 5 周，2 為第 9 周，3 為第 12 周，4 為第 15 周圖 3 BaP/DMBA 聯(lián)合組黏膜照片（二）組織病理學(xué)診斷1、空白對照組：正常地鼠黏膜是由 4-6 層細(xì)胞構(gòu)成的角化復(fù)層鱗狀上皮，細(xì)胞排列整齊，無上皮釘突或釘突不明顯�；讓蛹�(xì)胞明顯，上皮和肌層之間為薄層結(jié)

圖 1 空白對照組黏膜大體照片 圖 2 陰性對照組黏膜大體照片注：1 為第 5 周，2 為第 9 周，3 為第 12 周，4 為第 15 周圖 3 BaP/DMBA 聯(lián)合組黏膜照片（二）組織病理學(xué)診斷1、空白對照組：正常地鼠黏膜是由 4-6 層細(xì)胞構(gòu)成的角化復(fù)層鱗狀上皮，細(xì)胞排列整齊，無上皮釘突或釘突不明顯�；讓蛹�(xì)胞明顯，上皮和肌層之間為薄層結(jié)

8注：1 為第 5 周，2 為第 9 周，3 為第 12 周，4 為第 15 周圖 3 BaP/DMBA 聯(lián)合組黏膜照片（二）組織病理學(xué)診斷1、空白對照組：正常地鼠黏膜是由 4-6 層細(xì)胞構(gòu)成的角化復(fù)層鱗狀上皮，細(xì)胞排列整齊，無上皮釘突或釘突不明顯�；讓蛹�(xì)胞明顯，上皮和肌層之間為薄層結(jié)締組織，有少量散在的纖維細(xì)胞和血管，類似人類正常黏膜。2、陰性對照組：組織病理學(xué)表現(xiàn)與空白對照組相似，呈角化復(fù)層鱗狀上皮，各層細(xì)胞排列規(guī)則，為正常黏膜的組織學(xué)表現(xiàn)，結(jié)果見圖 4。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2804730