【摘要】：本研究的目的:γδT細胞與腫瘤免疫有著密切聯系,本研究旨在通過建立EB 病毒(EBV)轉化人類B 淋巴細胞的模型,從而研究細胞轉化前后膜表面分子的表達情況變化及γδT細胞對其的殺傷作用,以期找到γδT細胞識別的腫瘤抗原,為腫瘤的診斷和治療提供一定的幫助。 所采用的方法:(1) 將EBV 與人類B 淋巴細胞共同培養(yǎng),建立EBV 轉化B 淋巴細胞的模型;(2)通過流式細胞儀檢測EBV 轉化前后B 淋巴細胞表面HSP60 和HSP70 的表達情況;(3)用MTT法檢測γδT細胞對EBV 轉化前后B 淋巴細胞的殺傷作用;(4)用抗HSP60、HSP70 抗體封閉EBV 轉化后的B 淋巴細胞,測定γδT細胞對其的殺傷作用;(5)提取標本總RNA,用逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)分析EBV 轉化前后B 淋巴細胞中MICA 基因的表達。 本研究取得以下結果:(1)EBV 轉化人的B 淋巴細胞和單個核細胞(PBMC)中的B 淋巴細胞獲得成功,EBV 轉化人的全血中的B淋巴細胞則未獲成功;(2)正常B 淋巴細胞極少表達HSP60、HSP70,而EBV 轉化后的B 細胞則幾乎均表達HSP60 和HSP70 ;(3)自體γδT細胞對B 淋巴細胞有輕微的殺傷作用,而γδT細胞對EBV 轉化后的B 淋巴細胞的殺傷作用較之正常B 淋巴細胞高出10 余倍;異體γδT細胞對轉化前后B 淋巴細胞都有顯著的殺傷作用;(4)γδT細胞對EBV 轉化后B 細胞的殺傷作用可為抗HSP60 和HSP70 抗體所明顯阻斷;(5)正常B 淋巴細胞不表達MICA 基因;而EBV 轉化后的B 淋巴細胞則表達MICA 基因。
【學位授予單位】：中國協和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2001
【分類號】：R392
【圖文】：

固相抗體法體外擴增的γδT 細胞的免疫熒光分析外培養(yǎng) 14 天的外周血γδT 細胞系經抗 TCRγδ- FITC 和抗 TCRαβ- P結果。.Fluorescences analysis of γδT cell lines expanded by solie antibody method in vitro.δT cell lines from a normal individual after 14 days of culture were staineti-TCRγδ-FITC and anti-TCRαβ-PE respectively.靶細胞表面熱休克蛋白的免疫熒光染色疫熒光染色流式細胞儀分析 EBV 轉化前后 B 淋巴細胞表面、HSP70 表達情況。如圖 2 可見，1.8%的正常 B 淋巴細胞表 HSP60，1.2%的正常 B 淋巴細胞表面表達 HSP70，99.7%的

D圖 2．EBV 轉化前后 B 淋巴細胞表面 HSP60、HSP70 的免疫熒光析EBV 轉化前后 B 淋巴細胞經抗 HSP60、HSP70 抗體（小鼠 IgG1）、羊IgG1抗體-FITC 染色結果：A．B 淋巴細胞抗 HSP60 染色；B．EBV 轉化后巴細胞抗 HSP60 染色；C．B 淋巴細胞抗 HSP70 染色；D．EBV 轉化后 B 淋胞抗 HSP70 染色。Fig 2.Fluorescences analysis of hsp60 and hsp70 on membrsurface of B-lymphocytes and EB virus transforB-lymphocytes.B-lymphocytes and EB virus transformed B-lymphocytes were stained anti-hsp60，anti-hsp70 and sheep-anti-mice-FITC respectively. A. B-lymphocytes stained

M A B C D化前后 B 淋巴細胞 MICA 基因表達電泳圖ctrophoresis of MICA gene from B-lymph transformed B-lymphocytesNA 分子量標準(2kb，1kb，750bp，500bp，250b：轉化后 B 淋巴細胞擴增出短片段(約 700bp)；B擴增出長片段(約 1400bp)；C：B 淋巴細胞未擴細胞未擴增出長片段。A Marker (six zones: 2kb，1kb，750bp，500bp，250agment from EB virus transformed B-lymphocytes(ag fragment from EB virus transformed B-lymphC：no short fragment from B-lymphocytes；D：no lphocytes.

【相似文獻】

相關會議論文 前8條

1 張曉彤;李洪躍;劉雪梅;張青;凌熒;;EB病毒在兒童腺樣體肥大和扁桃體炎組織內的定量研究及意義[A];中華醫(yī)學會第十次全國耳鼻咽喉-頭頸外科學術會議論文匯編（下）[C];2007年

2 楊紅;鄭溪水;陳先禮;蘇意娟;繆松毅;張純瑜;;某部水痘爆發(fā)流行調查[A];第一屆全國疑難重型肝病大會、第四屆全國人工肝及血液凈化學術年會論文集[C];2008年

3 肖白;雷箴;袁海昕;范新萍;吳燕;賈興元;高斌;閆梅;王戰(zhàn)勇;劉敬忠;鈕淑蘭;戚豫;王立榮;;唐氏綜合征患者永生細胞系的建立[A];第六屆全國優(yōu)生科學大會論文匯編[C];2006年

4 吳一龍;李揚秋;王思愚;楊學寧;區(qū)偉;余輝;;1.6非小細胞肺癌組織中的EB病毒DNA[A];2000全國腫瘤學術大會論文集[C];2000年

5 梁英杰;宗永生;顧耀亮;張玉;馮沿芬;劉泳冬;陳耀龍;;血清學診斷鼻咽癌的酶聯免疫吸附檢測[A];中華醫(yī)學會病理學分會2007年學術年會暨第九屆全國病理大會論文匯編[C];2007年

6 馮沿芬;吳秋良;宗永生;梁建中;侯景輝;;鼻腔鼻竇部非霍奇金淋巴瘤及其與EB病毒感染的關系[A];中華醫(yī)學會病理學分會2007年學術年會暨第九屆全國病理大會論文匯編[C];2007年

7 張慶玲;楊玉芳;丁彥青;;構建熒光轉基因小鼠模型整體水平觀察B-LMP1基因功能的相關研究[A];中華醫(yī)學會病理學分會2007年學術年會暨第九屆全國病理大會論文匯編[C];2007年

8 盧萍;;小兒EB病毒感染45例臨床分析[A];2007年浙江省兒科學、小兒外科學學術年會論文匯編[C];2007年

相關博士學位論文 前1條

1 蔣欣欣;γδT細胞對EB病毒轉化B淋巴細胞的免疫識別[D];中國協和醫(yī)科大學;2001年

相關碩士學位論文 前1條

1 孫春霞;外邪致痹的臨床研究—人類微小病毒B19、EB病毒感染與類風濕關節(jié)炎相關性探討[D];河北醫(yī)科大學;2005年

本文編號：2799809