【摘要】：本研究的目的:γδT細胞與腫瘤免疫有著密切聯(lián)系,本研究旨在通過建立EB 病毒(EBV)轉(zhuǎn)化人類B 淋巴細胞的模型,從而研究細胞轉(zhuǎn)化前后膜表面分子的表達情況變化及γδT細胞對其的殺傷作用,以期找到γδT細胞識別的腫瘤抗原,為腫瘤的診斷和治療提供一定的幫助。 所采用的方法:(1) 將EBV 與人類B 淋巴細胞共同培養(yǎng),建立EBV 轉(zhuǎn)化B 淋巴細胞的模型;(2)通過流式細胞儀檢測EBV 轉(zhuǎn)化前后B 淋巴細胞表面HSP60 和HSP70 的表達情況;(3)用MTT法檢測γδT細胞對EBV 轉(zhuǎn)化前后B 淋巴細胞的殺傷作用;(4)用抗HSP60、HSP70 抗體封閉EBV 轉(zhuǎn)化后的B 淋巴細胞,測定γδT細胞對其的殺傷作用;(5)提取標(biāo)本總RNA,用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)分析EBV 轉(zhuǎn)化前后B 淋巴細胞中MICA 基因的表達。 本研究取得以下結(jié)果:(1)EBV 轉(zhuǎn)化人的B 淋巴細胞和單個核細胞(PBMC)中的B 淋巴細胞獲得成功,EBV 轉(zhuǎn)化人的全血中的B淋巴細胞則未獲成功;(2)正常B 淋巴細胞極少表達HSP60、HSP70,而EBV 轉(zhuǎn)化后的B 細胞則幾乎均表達HSP60 和HSP70 ;(3)自體γδT細胞對B 淋巴細胞有輕微的殺傷作用,而γδT細胞對EBV 轉(zhuǎn)化后的B 淋巴細胞的殺傷作用較之正常B 淋巴細胞高出10 余倍;異體γδT細胞對轉(zhuǎn)化前后B 淋巴細胞都有顯著的殺傷作用;(4)γδT細胞對EBV 轉(zhuǎn)化后B 細胞的殺傷作用可為抗HSP60 和HSP70 抗體所明顯阻斷;(5)正常B 淋巴細胞不表達MICA 基因;而EBV 轉(zhuǎn)化后的B 淋巴細胞則表達MICA 基因。
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號】：R392
【圖文】：

固相抗體法體外擴增的γδT 細胞的免疫熒光分析外培養(yǎng) 14 天的外周血γδT 細胞系經(jīng)抗 TCRγδ- FITC 和抗 TCRαβ- P結(jié)果。.Fluorescences analysis of γδT cell lines expanded by solie antibody method in vitro.δT cell lines from a normal individual after 14 days of culture were staineti-TCRγδ-FITC and anti-TCRαβ-PE respectively.靶細胞表面熱休克蛋白的免疫熒光染色疫熒光染色流式細胞儀分析 EBV 轉(zhuǎn)化前后 B 淋巴細胞表面、HSP70 表達情況。如圖 2 可見，1.8%的正常 B 淋巴細胞表 HSP60，1.2%的正常 B 淋巴細胞表面表達 HSP70，99.7%的

D圖 2．EBV 轉(zhuǎn)化前后 B 淋巴細胞表面 HSP60、HSP70 的免疫熒光析EBV 轉(zhuǎn)化前后 B 淋巴細胞經(jīng)抗 HSP60、HSP70 抗體（小鼠 IgG1）、羊IgG1抗體-FITC 染色結(jié)果：A．B 淋巴細胞抗 HSP60 染色；B．EBV 轉(zhuǎn)化后巴細胞抗 HSP60 染色；C．B 淋巴細胞抗 HSP70 染色；D．EBV 轉(zhuǎn)化后 B 淋胞抗 HSP70 染色。Fig 2.Fluorescences analysis of hsp60 and hsp70 on membrsurface of B-lymphocytes and EB virus transforB-lymphocytes.B-lymphocytes and EB virus transformed B-lymphocytes were stained anti-hsp60，anti-hsp70 and sheep-anti-mice-FITC respectively. A. B-lymphocytes stained

M A B C D化前后 B 淋巴細胞 MICA 基因表達電泳圖ctrophoresis of MICA gene from B-lymph transformed B-lymphocytesNA 分子量標(biāo)準(zhǔn)(2kb，1kb，750bp，500bp，250b：轉(zhuǎn)化后 B 淋巴細胞擴增出短片段(約 700bp)；B擴增出長片段(約 1400bp)；C：B 淋巴細胞未擴細胞未擴增出長片段。A Marker (six zones: 2kb，1kb，750bp，500bp，250agment from EB virus transformed B-lymphocytes(ag fragment from EB virus transformed B-lymphC：no short fragment from B-lymphocytes；D：no lphocytes.

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本文編號：2799809